[发明专利]一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法

说明书

本发明公开了一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备高纯度三萜皂苷化合物的方法。该方法用溶剂提取细柱五加叶得到细柱五加叶提取物浸膏，用低极性溶剂萃取除去色素后，依次用脂肪酸酯、正丁醇萃取，取正丁醇萃取物以体积比1‑4∶0.2‑0.8∶0.5‑1.5∶2‑5的脂肪酸酯∶脂肪醇∶甲醇∶水作为两相溶剂体系在高速逆流色谱仪上进行分离，得到五个三萜皂苷化合物acankoreoside B、acankoreoside D、acantrifoside A、acankoreoside A、acankoreoside C。本发明的三萜皂苷化合物分离制备方法具有提取率高，操作简单，溶剂用量少，无样品吸附、损失和污染，单体纯度高等优点。

技术领域

本发明涉及中药提取分离制备技术领域，尤其涉及一种利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中分离制备三萜皂苷化合物的方法。

背景技术

细柱五加(Acanthopanax gracilistylus W.W.Smith)为五加科五加属植物，其根皮为其主要的药用部分，具有强筋壮骨、祛风除湿、利水消肿、补益肝肾、利水消肿之功效。经过近几十年科学工作者其根皮化学成分的研究，作为药用的细柱五加根皮含有紫丁香苷、β-谷甾醇、五加酸、刺五加苷B1、贝壳烯酸、胡萝卜苷、各种有机酸、色素、挥发油等成分。近年来，国内外正全方位开发该属植物，包括茎、叶和果实等，药理研究结果表明，细柱五加叶中丰富的羽扇豆烷型三萜类化合物可抑制脂多糖诱导的巨噬细胞 RAW264.7，炎症因子TNF-α、IL-1β、HMGB1的分泌，其三萜类化合物在抗炎药物、肝病药物等领域具有很好的开发前景，通过近10多年对细柱五加叶的系统研究，细柱五加叶中的化学成分已基本明晰，对细柱五加叶中三萜类化合物的纯化工艺研究、动物活性研究及药物系统开发是今后的主要研究方向。

高速逆流色谱是20世纪80年代发展起来的一种连续高效的液-液分配色谱技术。通过两相互不相溶的溶剂体系，在高速旋转的情况下，实现样品在两相中的分配。高速逆流色谱技术，有其独特的优势，它可以克服样品不可逆吸附、样品物质的稳定性、溶剂的浪费、制备时间过长、制备量不足的劣势，而且其应用极性范围很广的化合物的分离，在天然产物研究中发挥着重要作用。已有研究表明，HSCCC可用于三萜类化合物的分离，如桔梗皂苷、科罗索酸、积雪草酸、熊果酸、人参皂苷等的分离，但对HSCCC用于分离五加叶中羽扇豆烷型三萜皂苷类化合物的研究未见报道。基于HSCCC的特性和优点，HSCCC用于细柱五加叶中系列羽扇豆烷型化合物的分离，有望很好地解决现有分离工艺的不足，为其产业化生产提供一种新的方法。

目前细柱五加叶三萜皂苷化合物分离制备方法主要有组合色谱法，包括反复硅胶柱层析、ODS柱层析、 Sephadex-LH20柱色谱、制备薄层色谱、半制备高效液相色谱等方法，这些方法不仅操作复杂，溶剂用量大，而且在分离过程中有吸附、损失和污染等现象，使整个分离过程效率不高。利用高速逆流色谱法从细柱五加叶中同时分离制备多种三萜皂苷化合物的方法未见报道。

发明内容

针对以上问题，本发明的目的在于提供一种提取率高，操作简单，溶剂用量少，无样品吸附、损失和污染，单体纯度高的细柱五加叶三萜皂苷化合物的分离方法。

本发明采用如下技术方案：

本发明的细柱五加叶三萜皂苷化合物分离制备具体操作步骤如下：

(1)取细柱五加叶，用6-15倍体积的溶剂提取，静置，过滤，然后减压蒸馏回收溶剂得到细柱五加叶提取物浸膏；细柱五加叶提取物浸膏用水分散，经低极性溶剂萃取除去色素后依次用脂肪酸酯、正丁醇萃取，将正丁醇萃取物减压蒸馏回收溶剂得到三萜皂苷粗提物；