[发明专利]一种双波长共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法

说明书

本发明涉及一种双波长共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。为了克服现有技术中对于成品中壳聚糖的含量难以定量，操作技术繁琐的技术不足，本发明提供一种双波长共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，本发明利用一定条件下，亮蓝染料与壳聚糖结合，形成一种能使体系中的共振瑞利散射信号明显增强的离子缔合物，并在345nm和445nm处出现了两个特征峰。在选定条件下，壳聚糖浓度在0.005‑1.8μg/mL范围内与共振瑞利散射强度有良好的线性关系，据此建立了一种测定壳聚糖含量的双波长共振瑞利散射法。本方法测定受壳聚糖的分子量的影响，具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好，抗干扰能力强和操作简便等优点。

技术领域

本发明涉及一种双波长共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。

背景技术

甲壳素(chitin)又名几丁质，是由N-乙酰-2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖以β-1，4糖苷键形式连接而成的多糖。其广泛存在于甲壳动物虾、蟹及昆虫等的外壳，自然界中的低等植物菌类、藻类的细胞，高等植物的细胞壁等。甲壳素每年生物合成的量多达1000亿吨，其存量在自然界中仅次于纤维素。

壳聚糖(chitosan，CTS)是线性氨基多糖甲壳素通过脱乙酰反应生成的物质，其分子链上分布着许多氨基、羟基和脱乙酰基，其分子量从几十万到几百万不等，在水溶液中形成各种分子内和分子间氢键，且这些氢键使壳聚糖形成疏水微区，进而形成其双螺旋结构。壳聚糖在酸性溶液中，氨基吸附质子后形成带正电荷离子，可以与带负电荷的阴离子通过静电结合及疏水作用形成缔合物。壳聚糖的优良特性分别运用在医药学、保健食品、水处理、金属提取及回收等诸多行业中具有广泛的用途，尤其是保健食品方面的应用逐渐广泛，因此准确测定壳聚糖的含量对于研究和开发壳聚糖具有重要意义。目前，壳聚糖含量的测定方法有光谱法、电化学法、滴定法、色谱法等四类。

共振瑞利散射(Resonance Rayleigh Scattering，RRS)法是指当瑞利散射位于或者接近于其分子吸收带的时候，电子吸收电磁波频率与散射频率相同，电子因共振而强烈吸收光的能量并产生再次的散射，而这吸收-再散射过程称为共振瑞利散射，且其由于散射强度比单纯瑞利散射提高了几个数量级，因此不再遵循瑞利定律。共振瑞利散射法是近年来才发展起来的灵敏度高、操作简单的分子光谱分析方法。目前共振瑞利散射法已广泛应用于生物大分子的分析、无机物及药物分析、痕量无机离子的测定及纳米离子表征等方面的研究。本文将其法应用于糖类物质的分析，建立测定壳聚糖的共振瑞利散射新方法，并研究其反应适宜条件及其影响因素。

亮蓝(Brilliant blue)是一种阴离子染料，在弱酸条件下，带负电荷的亮蓝与带正电荷的壳聚糖发生离子缔合反应，其离子缔合物在345nm、445nm处产生两个新的特征峰，且在一定浓度范围内，散射强度与壳聚糖含量呈线性关系。根据此特性，建立一种抗干扰能力强的共振瑞利散射法，此方法适合测定用于保健品中壳聚糖含量的定量分析。

发明内容

为了克服现有技术中对于成品中壳聚糖的含量难以定量，操作技术繁琐的技术不足，本发明提供一种双波长共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，本发明利用一定条件下，亮蓝染料与壳聚糖结合，形成一种能使体系中的共振瑞利散射信号明显增强的离子缔合物，并在345nm和445nm处出现了两个特征峰。在选定条件下，壳聚糖浓度在0.005-1.8μg/mL范围内与共振瑞利散射强度有良好的线性关系，据此建立了一种测定壳聚糖含量的双波长共振瑞利散射法。本方法测定受壳聚糖的分子量和脱乙酰度的影响，具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好，抗干扰能力强和操作简便等优点。

一种双波长共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其包括下述步骤：

1)绘制ΔI和不同分子量的壳聚糖浓度的标准曲线