[发明专利]一种果蝇诱杀剂的制备方法

权利要求书

1.一种果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

（1）取贝克酵母按质量比1：5加入酵母培养基中培养，取培养物按质量比10：5：2加入乙酰乙酸乙酯和氯乙酸乙酯，混合反应，离心，取滤渣，滤渣按质量比1：8加入乙酸乙酯混合，经硅藻土吸附层过滤，取滤液按质量比1：10加入氯化钠，用乙酸乙酯萃取，取萃取物用质量分数为26%氯化钠溶液洗涤，旋转蒸发，干燥，得基体物；

（2）取基体物按质量比1：4：1加入二氢吡喃和氢化铝锂混合，反应，得反应物A，取反应物A层析，取层析物按质量比3：1加入对甲苯磺酰氯混合，得混合物，取镁粉按质量比1：12~15：1加入四氢呋喃和溴代正壬烷，于-15℃混合1~2h，得混合物，按质量份数计，取10~12份混合物，5~6份基体物，2~3份四氢呋喃，20~30份氯化铵水溶液混合，搅拌反应，得反应物B，用乙醚萃取，取萃取液旋转蒸发，得旋转蒸发物，即性诱导剂；

（3）取土样按质量比1：5加入无菌水混合置于光照培养箱，将人工饲养的果蝇幼虫置于土壤中，保鲜膜封口，保鲜膜均匀扎孔10~15个，于25~28℃、保持土壤湿度50~60%，饲养幼虫，逐日观察果蝇幼虫的存活状况，收集死亡果蝇幼虫按质量比1：6加入无菌水混合，匀浆，取匀浆液涂布于分离纯化培养基中培养，挑取菌径最大的菌落，划线接种至分离纯化培养基中培养，重复划线培养2~3次，得纯化菌落，取纯化菌落按质量比1：9：5加入生理盐水和质量分数为0.05%吐温-80混合，制成菌悬液，取菌悬液接种至发酵培养基中，发酵培养，取发酵液离心，取上清液，得杀虫剂，取杀虫剂和性诱导剂按质量比2：5混合均匀，即得果蝇诱杀剂。

2.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中酵母培养基为按质量份数计，取1~2份NaH₂PO₄，0.8~1.2份(NH₄)2SO₄，0.2~0.4份MgSO₄·7H₂O，0.3~0.5份CaCl₂·2H₂O，1~2份酵母膏，15~30份葡萄糖，1~2份蛋白胨，500份水混合，121℃灭菌30min。

3.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中贝克酵母培养条件为28~30℃培养18~24h；反应条件为：25~28℃反应10~15h。

4.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）反应物A反应条件为：23~25℃反应1~2h；反应物B反应条件为：1~4℃搅拌反应12~15h。

5.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中分离纯化培养基：按质量份数计，取180~200份马铃薯，20~25份葡萄糖，20~23份琼脂，1000份蒸馏水，121℃灭菌15min；发酵培养基：按质量份数计，取10~15份玉米粉，25~30份麦麸，12~14份米粉，20~25份谷壳，300份水，121℃灭菌15min。

6.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中人工饲养的果蝇幼虫：饲养条件为温度28~30℃、相对湿度40~70%、光周期 L/D=16h/8h；土壤采集：取杨梅果树下的土壤，除去表土，选取表层以下20cm内的土壤，过80目筛去石块杂物，充分混合，于4℃密封保存。

7.根据权利要求1所述果蝇诱杀剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中分离培养条件：23~28℃培养3~5d；纯化培养条件为：25~28℃培养2~3d；菌悬液的接种量为10%，发酵培养条件：30~35℃发酵培养2~3d。