[发明专利]一组鉴定龟甲的特异性引物及其鉴定方法

权利要求书

1.一组用于鉴定龟甲的特异性引物，其特征在于，所述引物为PCR-1或PCR-2或PCR-3，PCR-1的上下游引物如SEQ.ID.NO.1和2所示；PCR-2的上下游引物如SEQ.ID.NO.3和4所示；PCR-3的上下游引物如SEQ.ID.NO.5和6所示。

2.如权利要求1所述的特异性引物，其特征在于，所述引物还包括引物对PTS-1或PTS-2并且和/或包括引物对PMS-1或PMS-2，PTS-1的上下游引物如SEQ.ID.NO.7和8所示；PTS-2的上下游引物如SEQ.ID.NO.9和10所示；PMS-1的上下游引物如SEQ.ID.NO.11和12所示；PMS-2的上下游引物如SEQ.ID.NO.13和14所示。

3.权利要求1或2所述的引物在鉴定龟甲样品真伪或掺伪中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用为权利要求1所述的引物结合权利要求2所述的引物鉴定龟甲中是否混有巴西龟甲或花龟甲。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述龟甲样品是指龟甲基原、药材和饮片。

6.一种特异性鉴定龟甲的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物、DNA阳性对照、PCR反应体系、电泳检测体系。

7.根据权利要求6述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括权利要求2所述的引物。

8.一种特异性鉴定龟甲的方法，其特征在于，按照下述步骤进行：

(1)制备龟甲样品的基因组DNA供试品溶液，通过核酸蛋白分析仪进行质量检查；

(2)利用权利要求1或2所述的特异性引物对DNA供试品进行PCR扩增；

(3)扩增产物以琼脂糖凝胶电泳分析和凝胶成像系统检测，并根据电泳条带的有无及分子量大小以鉴定龟甲的真伪和掺伪情况。

9.根据权利要求8所述的一种特异性鉴定龟甲的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的PCR扩增，其反应体系包括：1×PCR缓冲液，2.0mmol/L MgCl2，0.2mmol/L dNTPs，0.1μmol/L～0.4μmol/L引物对，0.625U～1.0U Taq DNA聚合酶，模板DNA 1ng～150ng，加灭菌双蒸水补足至25μL。

10.根据权利要求8所述的一种特异性鉴定龟甲的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的PCR扩增，其程序为：95℃ 3min；95℃ 30s，60℃～68℃ 10s～30s，72℃ 1min，循环数30～40；72℃ 5min～7min。