[发明专利]一种单宁酶固态发酵培养基制备方法及其应用

权利要求书

1.一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1固态发酵培养基原料预处理：取应季修剪的杨梅枝叶，按叶和枝条分开；新鲜杨梅叶用热风吹至半风干，再将半风干的杨梅叶转入烘箱中烘干；杨梅枝直接用烘箱烘干；取烘干的杨梅叶粉碎过筛，取筛下物备用；将烘干的杨梅枝扎成小段，粉碎后过筛，取筛下物备用；取烘干或者晒干的水稻秸秆，截成小段，备用；将杨梅叶粉末、杨梅枝粉末及水稻秆段按照质量比(1：1：1)-(3：3：1)的比例混合，充分搅拌均匀，让水稻秆均匀分布在粉末中；

步骤2固体基质外加营养液制备：

准备下述重量份的原料：

葡萄糖40-60g，

单宁酸3-8g，

玉米浆3-8mL，

硫酸铵10-30g，

将上述原材料完全溶解于1L去离子水中；调节营养液pH至5-6，获得固体基质外加营养液；

步骤3培养料制备及灭菌：将混合均匀的杨梅叶粉末、杨梅枝粉末及水稻秆段作为固体基质，与固体基质外加营养液按照质量体积比(1：2)-(1：3)，混合并搅拌均匀制备获得培养料；培养料经灭菌后获得单宁酶固态发酵培养基。

2.根据权利要求1所述的一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，步骤1所述的新鲜杨梅叶用热风吹至半风干为将新鲜杨梅叶用30-50℃热风吹12-24小时，使新鲜杨梅叶水分逐步丢失但叶表维持绿色；步骤1所述的半风干的杨梅叶采用70-90℃烘干。

3.根据权利要求1所述的一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，步骤1中所述的烘干的杨梅叶粉碎后过30-50目筛；步骤1中所述的杨梅枝粉碎后过10-30目筛；步骤1中所述的水稻秸秆截成长度为0.2-0.3cm的小段。

4.根据权利要求1所述的一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，步骤2中所述的pH为5.5。

5.根据权利要求1所述的一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，步骤3所述的灭菌方法为121℃高压蒸汽灭菌10min。

6.一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：采用权利要求1-5任一权利要求所述的单宁酶固态发酵培养基应用于单宁酶的制备。

7.根据权利要求6所述的一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：单宁酶的制备包括以下步骤：

步骤1：将产单宁酶丝状真菌菌株打碎制备菌体悬液接入固态发酵培养基中，搅拌均匀；

步骤2：遮光，恒温静置培养，发酵后可获得单宁酶。

8.根据权利要求7所述的一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：所述的产单宁酶丝状真菌菌株为米曲霉。

9.根据权利要求7所述的一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：步骤1中每15g单宁酶固态发酵培养基加入8mL菌体悬液。

10.根据权利要求7所述的一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：步骤2中恒温稳定为25-35℃，所述的发酵时间为72-120h。