[发明专利]胶质瘤诊断标志物circ10:72715111|72715902及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了胶质瘤诊断标志物circ10:72715111|72715902及应用。在本发明中，首次发现胶质瘤患者血清外泌体中circ10:72715111|72715902的表达水平相比于对照组明显升高(p＝0.0322)，ROC分析则显示其对胶质瘤具有较高诊断价值(AUC＝0.882，P0.005，灵敏度和特异性分别为79.2％和100％)。因此通过检测胶质瘤患者血清外泌体中circ10:72715111|72715902的表达水平，可对胶质瘤患者做出早期、快速的无创性诊断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤诊断的血清circRNA标志物circ10:72715111|72715902、以及检测该标志物的试剂用于制备胶质瘤诊断制剂的应用、还有试剂盒。

背景技术

胶质瘤又叫胶质细胞瘤或神经胶质瘤,其发病率高,恶性程度高，治疗复杂且预后差,是对人类健康造成巨大威胁的一类疾病，其中成年人多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)中位发病年龄约为65岁，中位生存期仅为14个多月，5年病死率在全身肿瘤中仅次于胰腺癌和肺癌,位列第3位。在神经系统肿瘤中，原发性中枢神经系统(central nervous system,CNS)肿瘤的发生率约为5:100 000～10:100 000，其中胶质瘤就占40％，而恶性胶质瘤约占胶质瘤的50％。恶性胶质瘤给患者带了巨大痛苦，给社会造成巨大经济负担,一直以来都是肿瘤研究的热点。因此，寻找胶质瘤诊断标志物对患者进行诊断分析，尽早确诊病情，并相应地选择合理的后续治疗方案，提高生存率，是神经科学领域亟待解决的研究任务。

环状RNA(Circular RNA,circRNA)是一类具有闭合环状结构的内源性非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA)，主要由前体RNA(pre-mRNA)通过可变剪切加工产生，circRNA广泛存在于所有真核生物中，并且非常稳定。目前，circRNA的研究已经成为了RNA研究领域的新热点，研究发现circRNA在转录本中占有相当大的比例，有的表达丰度甚至显著高于其他转录本。同时，circRNA对基因的表达有重要调控作用，在生物的发育进程中发挥了重要的生物学功能，如充当miRNA海绵、作为内源性RNA以及生物标记物，在疾病的诊断与治疗中也发挥重要作用。研究发现circRNA在一些疾病的发生中扮演了重要角色，包括动脉硬化、神经系统紊乱、糖尿病和癌症的发生。近年来逐渐发现外泌体中也含有大量的CircRNA，可能发挥重要作用。外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。外泌体是细胞与细胞间通讯的重要的分子，参与诸多生理与病理过程。外泌体所携带的RNA统称为外泌体来源RNA，其中circRNA具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特点，有望作为液体活检分子标志物，在精准医学发展上有着光明的前景。

发明内容

本发明的第一个目的是：提供一种用于胶质瘤诊断的血清外泌体circRNA标志物。

主要内容包括：一种用于胶质瘤诊断的血清外泌体circRNA标志物circ10:72715111|72715902，其序列如SEQ NO:1所示。该circRNA位于人类的第10号染色体上，全长792bp。

本发明的第二个目的是，提供检测所述的circRNA标志物在血清外泌体中表达量的试剂在制备胶质瘤诊断制剂中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种胶质瘤诊断试剂盒，其能够测定血清外泌体中的circ10:72715111|72715902的含量。

所述的胶质瘤诊断试剂盒，含有检测circ10:72715111|72715902含量的PCR引物。优选引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的胶质瘤诊断试剂盒，除circ10:72715111|72715902的引物外，还含有从血清中提取外泌体、由外泌体中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。