[发明专利]一种高轮环藤宁和千金藤素含量的地不容的组培繁育方法

权利要求书

1.一种高轮环藤宁和千金藤素含量的地不容的组培繁育方法，其特征在于，所述组织繁育方法包括以下步骤：

1)芽诱导，选取高轮环藤宁和千金藤素含量的地不容带节嫩茎段为外植体，经过灭菌操作，接种到芽诱导培养基上培养，所述芽诱导培养基配方为1/2MS+BA 0～0.5mg·L^-1+IBA0～0.2mg·L^-1，诱导新芽；

2)愈伤诱导，当新芽长到2～3cm后剪切转接到愈伤诱导培养基上培养，所述愈伤诱导培养基为MS+BA1.0～2.0mg·L^-1+NAA 0.2mg·L^-1，诱导带芽愈伤；

3)不定芽分化，将带芽的愈伤接到不定芽诱导分化培养基上培养，所述不定芽分化培养基配方为MS+BA0.4～0.8mg·L^-1+NAA 0.2mg·L^-1，诱导不定芽；

4)生根培养，剪切不定芽尖转接到生根培养基上培养，所述生根培养基配方为1/2MS+IBA 0.5～1.0mg·L^-1+嘧啶醇1.0～2.0mg·L^-1，诱导生根；

5)炼苗，当步骤4)诱导出根6～9根，长3～5cm后，进行炼苗3～5天；

6)移栽，清洗干净根上的培养基，移栽到装有灭菌处理的土壤基质，浇水；

7)水、肥及病虫害预防管理，即得所需地不容大田移栽壮苗。

2.根据权利要求1所述地不容组培繁育方法，其特征在于，步骤1)所述地不容外植体选取时间为每年公历3-4月份，截取嫩茎段用于外植体。

3.根据权利要求1所述地不容组培繁育方法，其特征在于，步骤1)所述灭菌操作为流水冲洗30min，使用75％酒精水溶液浸泡20-30s，0.2％HgCl₂灭菌6-10min后，无菌水漂洗后，擦干。

4.根据权利要求1所述地不容组培繁育方法，其特征在于，步骤1)所述芽诱导培养基配方优选1/2MS+BA 0.5mg·L^-1+IBA 0.1mg·L^-1。

5.根据权利要求1所述地不容组培繁育方法，其特征在于，步骤2)所述愈伤诱导培养基MS+BA1.5mg·L^-1+NAA 0.2mg·L^-1。

6.根据权利要求1所述地不容组培繁育方法，其特征在于，步骤3)所述不定芽分化培养基配方为MS+BA0.5mg·L^-1+NAA 0.2mg·L^-1，所述芽尖0.5～1cm。

7.根据权利要求1所述地不容组培繁育方法，其特征在于，步骤4)所述生根培养基配方为1/2MS+IBA 0.8mg·L^-1+嘧啶醇1.0-2.0mg·L^-1。

8.根据权利要求1所述地不容组培繁育方法，其特征在于，步骤6)所述土壤基质为腐殖土：细河沙质量比1:1，所述灭菌处理为500倍水稀释多菌灵，500水稀释倍敌白虫，分别进行表面喷湿的灭菌处理。

9.根据权利要求1所述地不容组培繁育方法，其特征在于，所述芽诱导培养基、愈伤诱导培养基、不定芽分化培养基和生根培养基均为灭菌后培养基，灭菌方法为121℃高压灭菌20min，灭菌前pH调至5.5-6.0。

10.根据权利要求1所述地不容组培繁育方法，其特征在于，步骤1)-5)的培养温度为25±2℃，光照强度为1600～1800lx。