[发明专利]Glypican-3特异性抗体及其特异性CAR-T细胞

说明书

本发明涉及Glypican‑3特异性抗体及其特异性CAR‑T细胞。具体地，本发明涉及一种抗人GPC‑3单克隆抗体，其包含具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的VH的和具有SEQ ID NO：6所示氨基酸序列的VL。本发明还涉及一种嵌合抗原受体融合蛋白和包含该融合蛋白的CAR‑T细胞，从N末端至C末端包括：(i)本发明的单链抗体(scFv)，(ii)跨膜结构域，(iii)至少一种共刺激结构域，和(iv)激活域。

技术领域

本发明涉及基因治疗领域，更具体地涉及一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3，GPC 3)特异性抗体及其特异性CAR-T细胞，其可用于肿瘤的过继免疫基因治疗。

背景技术

免疫治疗是一种非常有前途的治疗癌症的方法。T细胞或T淋巴细胞是免疫系统有效的武器，它们能够持续性地帮我们区分正常细胞和外来抗原或非正常细胞，如癌症或被感染的细胞。基因修饰的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)是设计肿瘤特异性T细胞的常见方案。将靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR-T细胞输入患者(称为过继细胞转移或ACT)，这代表了一种有效的免疫治疗方法。与化疗或抗体技术相比，CAR-T技术的优点在于重编程的T细胞可以增殖并在患者体内持续存在(“活的药物”)。

CAR(嵌合抗原受体)通常是由一个单克隆抗体衍生的单链抗体(scFv)通过铰链和跨膜结构域连接到可变数目的胞内信号结构域：单个细胞活化的CD3-ζ结构域；以及和CD3-ζ结构域相连的CD28，CD137(4-1BB)或其他共刺激域(也可用CD27信号结构域代替CD28或CD137结构域)(图1)。CAR的发展从第一代(没有共刺激域)到第二代(具有一个共刺激域)到第三代CAR(具有多个共刺激域)。生成的具有多个共刺激域的CAR(即所谓的第三代CAR)会产生增加的细胞溶解活性，并显着改善CAR-T细胞的持续性，表现出增强的抗肿瘤活性。

然而，目前嵌合抗原受体的研究还有很多不足，还存在复发率高、安全性低等问题。因此，本领域迫切需要开发特异性好、疗效稳定、副作用小的嵌合抗原受体。

发明内容

本发明的目的在于提供Glypican-3特异性抗体及其特异性CAR-T细胞。

在本发明的第一方面，提供了一种抗人GPC-3单克隆抗体，所述抗体具有：

(i)氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示的重链可变区；和

(ii)氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示的轻链可变区。

在另一优选例中，所述抗体与人GPC-3蛋白的N末端的前55-200个氨基酸区域结合。

在另一优选例中，所述的抗体选自：动物源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、或其组合。

在另一优选例中，所述的抗体为双链抗体、或单链抗体。

在另一优选例中，所述的抗体为单克隆抗体。

在本发明的第二方面，提供了一种单链抗体，所述的单链抗体具有：

(i)氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示的重链可变区；和

(ii)氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示的轻链可变区。

在另一优选例中，所述的单链抗体还包含VH和VL之间的接头。

在另一优选例中，所述接头的氨基酸序列如SEQ ID NO.:7所示。

在另一优选例中，所述接头的氨基酸序列为3-5个重复的SEQ ID NO.:7所示的序列。

在另一优选例中，所述的单链抗体具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述的单链抗体与人GPC-3蛋白的N末端的前55-200个氨基酸区域结合。