[发明专利]一种基于丙烯酰胺族金属螯合单体的蛋白亲和印迹水凝胶聚合物的制备方法

权利要求书

1.一种基于丙烯酰胺族金属螯合单体的蛋白亲和印迹水凝胶聚合物的制备方法，其特征在于，将丙烯酰胺族单体与二价金属离子螯合后，对目标蛋白进行特异性吸附结合、移除后得到聚合物，包括以下步骤：

S1取甲基丙烯酸酯类、丙烯酸酯类、丙烯酰氯类中的一种与0.5摩尔比亚氨基二乙酸或氨基三乙酸并搅拌混合，加入无水氢氧化钾进行反应，所述无水氢氧化钾与以上混合物摩尔比为（0.04-0.06）：1，缓慢升高温度到60-80℃，反应3-6小时，减压蒸馏除去未反应完全的试剂，调节pH至碱性，加入氯仿，摇晃后静置分层，去上层水溶液，减压干燥，得到丙烯酰胺族可与金属离子螯合的单体；

S2在水相介质中，加入上述步骤制备丙烯酰胺族可与金属离子螯合的单体，并引入0.1-0.3摩尔比的一种或多种二价金属离子，搅拌 30-120min进行螯合反应，所述的单体和二价金属离子形成稳定的八面体络合结构；

S3引入占单体5-25%质量比的蛋白模板分子，使金属螯合单体与蛋白模板分子形成稳定复合物；

S4加入一种或多种可与丙烯酰胺族单体共聚形成凝胶态聚合物的交联剂及引发剂和乳化剂吐温80，所述交联剂用量为单体物质的量的30-50％，所述引发剂用量为单体重量的1.3～12％，所述乳化剂用量为单体重量的0.2～2.5％；

S5将上述水相溶液加入由三氯甲烷、正己烷、司盘80组成的反相悬浮介质，所述水相溶液、三氯甲烷、正己烷、司盘80的体积比为（25~40）：（20~40）：（1~5）：（15~25），通过100-15000转/分钟的搅拌速度搅拌使体系内形成粒径0.1-1000微米的油包水性乳液液滴，待悬浮液滴粒径稳定后，通入氮气；

S6通过加热方式引发或者紫外辐照方式引发使单体与交联剂共聚形成具有亲和印迹水凝胶聚合物；

S7使用乙腈、N，N'-二甲基甲酰胺、竞争络合剂中的一种，使蛋白模板分子从亲和印迹水凝胶聚合物上移除，即可得到基于丙烯酰胺族金属螯合单体的蛋白亲和印迹水凝胶聚合物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1中所述甲基丙烯酸酯类为甲基丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸乙酯，甲基丙烯酸丁酯中的一种；所述丙烯酸酯类为丙烯酸甲酯，丙烯酸乙酯，丙烯酸丙酯中的一种。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1为在配有搅拌桨，温度计，冷凝管和加料口的四口圆底烧瓶中，加入200ml三氯甲烷，50g甲基丙烯酸乙酯和0.5摩尔比亚氨基二乙酸并搅拌混合，加入1.8g 无水氢氧化钾进行反应，缓慢升高温度到80℃，该温度下反应3小时后，减压蒸馏除去未反应完全的甲基丙烯酸乙酯和反应产物乙醇，然后滴加1mol/l的NaOH调节pH至10，加入100ml的氯仿，摇晃后静置分层，去上层水溶液，旋转蒸发仪上减压干燥，得到丙烯酰胺族可与金属离子螯合的单体甲基丙烯酸基氨基二乙酸钠。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1为在配有搅拌桨，温度计，冷凝管和加料口的四口圆底烧瓶中，加入200ml三氯甲烷，100 g甲基丙烯酰氯和0.5摩尔比氨基三乙酸并搅拌混合，加入5g 无水氢氧化钾进行反应，缓慢升高温度到60℃，该温度下反应6小时后，减压蒸馏除去未反应完全的甲基丙烯酰氯和反应产物乙醇，然后滴加1mol/l的NaOH调节pH至10，加入180ml的氯仿，摇晃后静置分层，去上层水溶液，旋转蒸发仪上减压干燥，得到丙烯酰胺族可与金属离子螯合的单体甲基丙烯酸基氨基三乙酸钠。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S2中二价金属离子为Fe2+、Co2+、Cu2+、Ni2+、Zn2+中的一种或多种。

6.根据权利要求1或5所述的制备方法，其特征在于，所述S2中二价金属离子用量为10-50mmol。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S3中蛋白模板分子为牛血清白蛋白，溶菌酶，核糖核酸酶，血红蛋白中的一种或多种。