[发明专利]与结直肠癌预后相关的miRNA标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术和医学技术领域。更具体地说，本发明涉及一种与结直肠癌预后相关的miRNA标志物及其应用。

背景技术

结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)是常见的消化道癌症之一，并且是全世界癌症相关死亡的第三主要原因。结直肠癌肝转移的发生是一个多因素和多步骤的过程。约20-25％的CRC患者最初被诊断为肝转移，并且高达40-50％的患者在原发性肿瘤切除术后发生肝转移。大多数结直肠肝转移患者不适合根治性手术切除，五年存活率≤10％。

结直肠癌患者肝转移的发生除了与原癌基因及抑癌基因表达情况异常或丢失有关，也与“表观遗传学”，如乙酰化、甲基化和非编码RNA调控紧密相关。有研究证实，在结直肠癌的肝转移发生进展过程中，miRNA广泛参与其调控，有学者称这类miRNA为“metastamiR”。

微小RNA(miRNA)是类长度为18-25个核苷酸的内源非编码RNA，其通过与信使RNA的3'非翻译区(UTR)碱基结合，在转录后水平调节靶基因的表达，从而使翻译受到抑制或信使RNA裂解。高达20-30％的基因的表达由miRNA来调节。通过调节生理和病理过程，差异表达的miRNA在肿瘤的发生、进展、转移和复发中起着重要作用。2003年，Michael首次提出结直肠癌中存在差异表达的miRNA。随后，关于结直肠癌的miRNA的研究越来越多。某研究表明，存在miRNA在结直肠肿瘤发生和发展的不同阶段差异表达(高级别腺瘤-肿瘤早期-肿瘤晚期)。miR-543通过靶向HMGA2，KRAS和MTA1来抑制结直肠癌细胞系的增殖和转移，并且有望成为转移性结直肠癌的新型诊断和预后生物标志物。与健康受试者相比，CRC患者中较高水平的miR-211提示较差的预后。大量的研究表明，循环miRNA可作为潜在的诊断和预后标志物。近年，虽然miRNA已经得到大量的研究和验证，但是结直肠癌肝转移相关miRNA潜在的作用和功能很大程度上仍然未知，需要进一步发现和验证。

结直肠癌肝转移的病人，以手术为主，辅以放化疗、介入治疗及靶向治疗的综合治疗使患者生存时间得到了显著提高。但随着治疗策略的不断提升，新的问题也不断涌现。根治性手术治疗可将结直肠癌肝转移的5年生存率提高至50％，对于选择性高的结直肠癌肝转移患者，甚至可以达到60％；但对于可切除的结直肠癌肝转移病人，术后仍有将近50％的患者会出现肿瘤复发。

传统的筛检方法，如腹腔镜，细针抽吸细胞学和影像学方法，如增强计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)为侵入性的、并发症高或典型指征不足，因此难以成为结直肠癌肝转移患者早期筛选的有效方法。因此，迫切需要寻找早期诊断和预后评估的非侵入性精准的生物标志物，用于结直肠癌患者的诊断和治疗。

发明内容

本发明的目的是提供与结直肠癌预后相关的miRNA标志物及其应用，通过生物信息学方法挖掘与结直肠癌肝预后有关的miRNA标志物，为其临床应用提供重要的理论基础。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了与结直肠癌预后相关的miRNA标志物，该标志物在血浆中为miR-96或miR-155，在组织中为miR-99b，通过血浆中miR-96或miR-155，或者组织中miR-99b进行结直肠癌预后。

所述的与结直肠癌预后相关的miRNA标志物在制备结直肠癌预后试剂、试剂盒中的应用。

本发明至少包括以下有益效果：

第一，血浆较易获得，且与传统的筛检方法相比，属于无创检查，极大地方便了医疗人员的使用，减轻了患者的痛苦。

第二，血浆中的miRNA反映的是机体整体的病理、生理情况，其检测结果具有精确而详细的指导意义。

第三，所筛选出的与结直肠癌预后相关的miRNA可作为结直肠癌预后的无创标志物，为其临床应用提供了重要的理论基础。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本发明所述的技术方法和数据分析流程框图；

图2为本发明所述的肝癌组织及其癌旁正常肝组织差异性miRNA聚类分析表达谱图；

图3为本发明所述的血浆中总RNA凝胶电泳图；

图4为本发明所述的血浆中miRNAs实时荧光定量PCR的扩增和熔解曲线图；

图5为本发明所述的结直肠癌患者无远处转移和肝转移患者、健康人血浆miRNA的表达水平图；