[发明专利]从复杂样本中提取并纯化沙门氏菌DNA的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种从复杂样本中提取并纯化沙门氏菌DNA的试剂盒及方法，属于分子生物学领域。本发明从复杂样本中提取并纯化沙门氏菌DNA的试剂盒，包括：1）偶联了gp13蛋白的羧基化纳米磁珠CPBA‑MNPs；2）样本稀释液；3）样本裂解液；4）核酸清洗液；5）DNA洗脱液6）核酸吸附磁珠。本发明使用偶联了gp13蛋白的羧基化纳米磁珠CPBA‑MNPs特异性结合沙门氏菌继而对沙门氏菌进行纯化，然后将纯化后的沙门氏菌用磁珠法提取DNA。整个过程无需沙门氏菌的分离纯化培养，直接进行DNA提取；简化实验过程，极大的节约了实验时间。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别涉及一种从复杂样本中提取并纯化沙门氏菌DNA的试剂盒及方法。

背景技术

沙门氏菌（Salmonella）是革兰氏阴性肠道菌，一种常见的人兽共患病原菌，不仅引起各种动物疾病，而且与人类多种疾病有关。沙门氏菌可分为肠道沙门氏菌和邦戈尔沙门氏菌2个种，肠道沙门氏菌可分为6个亚种。

沙门氏菌噬菌体P22是一类以沙门氏菌为宿主的病毒，宿主专一性很强。gp13位于噬菌体P22长尾丝末端，其C端能够识别宿主菌表面受体，引发噬菌体吸附到沙门氏菌表面的过程，是噬菌体P22识别受体的关键蛋白。

复杂样本是指食物，粪便，土壤，呕吐物等样本，这些样本一般都含抑制下游PCR或者NGS检测的抑制剂，如复杂多糖，胆酸盐，脂类和尿酸等。传统从复杂样本（食物，粪便，土壤，呕吐物等）中提取沙门氏菌DNA的方法需要先从样本中分离并纯化培养菌株，再从纯化好的菌株中提取核酸，过程比较复杂，所用时间较长。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，解决现有从复杂样本中提取沙门氏菌DNA的方法过程复杂、所需时间长的问题，本发明提供了一种从复杂样本中提取并纯化沙门氏菌DNA的试剂盒及方法。

本发明的技术方案为：

一种从复杂样本中提取并纯化沙门氏菌DNA的试剂盒，其特征在于，包括：

1）偶联了gp13蛋白的羧基化纳米磁珠CPBA-MNPs；

2）样本稀释液；

3）样本裂解液；

4）核酸清洗液；

5）DNA洗脱液；

6）核酸吸附磁珠。

作为优选方案， 1）中偶联了gp13蛋白的羧基纳米磁珠CPBA-MNPs的制备方法为：

a）采用gp13蛋白的沙门氏菌表达系统，可溶性表达gp13蛋白并纯化；

b）活化羧基化纳米磁珠；

c）gp13蛋白与羧基化纳米磁珠偶联。

进一步地， c）gp13蛋白与羧基化纳米磁珠偶联的具体过程为：

以含有Tween-20的硼酸盐溶液为偶联缓冲液，用所述偶联缓冲液清洗羧基化纳米磁珠；

将所述羧基化纳米磁珠、纯化后的gp13蛋白以及偶联缓冲液混合，20-30℃下偶联2-4小时；磁性分离去除上清液，加入PBST溶液重悬磁珠，20-30℃反应30-90min封闭磁珠表面未反应的活化羧基基团；

磁性分离上清液，采用PBS或保存溶液洗涤后，置于保存溶液中，4℃保存。

作为优选方案，所述偶联缓冲液的pH为7.5-8.5。更优选的，所述偶联缓冲液的pH为8.5。