[发明专利]甘赖脯胰岛素结晶的制备方法

权利要求书

1.甘赖脯胰岛素结晶的制备方法，所述方法包括向含甘赖脯胰岛素的结晶液中以两步或更多步的方式添加Zn离子进行两步或更多步结晶，其中，以Zn与甘赖脯胰岛素的质量比计，第一步结晶时所添加的Zn离子的量为0.1％-0.8％，其它步结晶时所添加的Zn离子的量为0.1％以上，且各步所添加的Zn离子总量为0.4％以上。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述第一步结晶时所添加的Zn离子的量为0.2％-0.5％。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述其它步结晶时所添加的Zn离子的量分别为0.3％-2.0％。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，结晶时的温度为10-24℃，优选地，结晶时的温度为14-22℃。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，结晶时的pH为6.0-9.0，优选地：第一步结晶时的pH为7.2-8.0，其它步结晶时的pH为6.0-6.7。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述第一步结晶时和其它步结晶时需要进行搅拌。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述方法包括向含甘赖脯胰岛素的结晶液中以两步的方式添加Zn离子进行两步结晶，包括下述步骤：

1)配制所述含甘赖脯胰岛素的结晶液，所述结晶液包含甘赖脯胰岛素、有机溶剂、有机酸、盐、和酚类物质，优选地，在4℃以上配制所述结晶液，进一步优选在4-30℃配制，更优选在25-30℃配制。

2)以Zn与甘赖脯胰岛素的质量比计，向所述结晶液中添加0.1％-0.8％的Zn离子，并将pH值调节至8.1-9.0，优选地调节至8.3-8.5，使所述结晶液完全澄清；

3)将所述步骤2)的结晶液pH调至7.2-8.0，优选地调节至7.4-7.7，搅拌，并将温度调节至10-24℃，优选地调节至14-22℃，进行析晶；和

4)在所述步骤3)析晶结束之后，以Zn与甘赖脯胰岛素的质量比计，再次添加0.1％以上的、且与所述步骤2)中所添加的锌离子量的总量为0.4％以上的Zn离子，搅拌，调节pH至6.0-6.7，优选地调节pH至6.3-6.5，在10-24℃，优选地在14-22℃完成结晶。

8.根据权利要求1或7所述的制备方法，其中，在所述其它步结晶时或步骤4)结晶时，还包括在添加Zn离子之后再添加盐至终浓度为1mol/L以上，优选地，添加盐至终浓度为2-4mol/L，更优选地，所述盐为醋酸铵。

9.根据权利要求6或7所述的制备方法，其中，搅拌的速度为300转/分以上，优选为500转/分以上，更优选为500-1500转/分。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其中，在所述步骤1)的结晶液中，甘赖脯胰岛素的浓度为3-50g/L，优选地为15-40g/L，进一步优选为25-30g/L；所述有机溶剂选自乙腈、甲醇、乙醇、正丙醇或异丙醇，含量为10-30％(体积/体积)；所述有机酸选自乙酸、柠檬酸或甘氨酸，含量为0.1-2.0M；所述盐选自氯化钠、氯化铵、硫酸铵、醋酸铵、乙酸钠或柠檬酸钠，含量为0.1-0.4M；所述酚类物质选自苯酚、间甲苯酚、对羟基苯甲酸甲脂或它们的混合物，含量为0.05-0.5％(质量/体积)；以及所述锌离子以锌盐的形式加入，所述锌盐选自氯化锌、氧化锌、乙酸锌、溴化锌或硫酸锌；优选地：所述有机溶剂为乙醇，含量为15-20％(体积/体积)；所述有机酸为乙酸，含量为0.5-1.0M；所述盐为氯化钠，含量为0.2-0.3M；所述酚类物质为苯酚，含量为0.1-0.2％(质量/体积)。