[发明专利]一种紫色马铃薯的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养，尤其涉及一种紫色马铃薯的组织培养方法。

背景技术

紫色马铃薯属茄科一年生作物，原产安第斯山区。薯型长椭圆型，表皮光滑，薯肉呈紫黑色，富含花青素、Vc、胡萝卜素等，兼具食用、药用功能。花青素是存在于植物中的水溶性色素，属类黄酮化合物，是目前科学界发现的防治疾病，维护人类健康最直接、最有效、最安全的自由基清除剂，其清除自由基的能力是VC的20倍，VE的50倍。此外，紫马铃薯块茎淀粉含量高，口感较好，品质极佳，适合深加工。因此，紫马铃薯具有很好的研究开发和综合利用价值。

但在紫马铃薯的田间试植和组培快繁的过程中，存在以下两个问题:

一是紫马铃薯田间植株病毒发病严重。经检测，马铃薯病毒病是由18种病毒复合侵染所致，其中，9种是专门寄生于马铃薯的病毒，另9种是来自其它寄主植物的病毒。其中的马铃薯Y病毒(Potato Virus Y,PVY)、马铃薯卷叶病毒(Potato Leafroll virus,PLRV)、马铃薯X病毒(Potato Virus X-PVX)及马铃薯S病毒(Potato Virus S,PVS)，这4种是危害马铃薯(包括紫马铃薯)最严重的病毒，是农业部严格规定必须植检的重点病毒种类；同时这些病毒又均具有难以分离、纯化的特点。

二是紫马铃薯组培快繁污染率高。在采用传统马铃薯茎尖脱毒的情况下，存在有操作难度大、工作效率低(在显微镜下，用手术工具连续剥离十余层包裹于茎尖外的茎片)，导致难以彻底剥离与消毒，一般外植体污染率高达60％左右；同时还存有外植体分化速度和脱毒试管苗繁殖速度较慢，微型薯长势弱及移植大田生产薯亩产偏低等问题。

目前，采用以紫马铃薯块茎为外植体进行脱毒和组培快繁的技术，目前鲜见有文献报导。

发明内容

发明目的：针对紫色马铃薯组培传统茎尖脱毒技术所存在的操作繁琐、效率低、消毒难彻底、组培苗污染率高等问题，本发明提出一种操作简便、效率高、消毒易彻底、外植体污染率低、繁殖速度快，苗质好的紫色马铃薯的组织培养方法。

技术方案：本发明所述的紫色马铃薯的组织培养方法，包括：以紫色马铃薯的块茎为外植体，接种于分化培养基上诱导愈伤，愈伤形成后取愈伤再次接种于分化培养上进行培养，获得脱毒幼苗；将所述的脱毒幼苗接种于继代培养基上进行继代增殖；其中，所述的分化培养基含有1.5-2.5mg/L NAA和4.5-5.5mg/L6-BA。

所述分化培养基的组成为：基础培养基+1.5-2.5mg/L NAA+4.5-5.5mg/L6-BA+30-32g糖/L+6.8-7.2g/L琼脂，ph为5.8-6.0。

优选的，NAA的浓度为2-2.5mg/L NAA，6-BA的浓度为5-5.5mg/L。.

诱导愈伤的条件为：光照强度4000-4500Lux，温度25-27℃，每日光照时间为14-16小时。

所述继代培养基的组成为：基础培养基+30-32g糖/L+6.8-7.2g/L琼脂，ph为5.8-6.0。

所述的基础培养基为MS培养基，糖为蔗糖。

所述外植体的制备方法为：将紫色马铃薯的块茎消毒后去皮，取薯心部分，切割成薯块。

所述消毒方法包括：将马铃薯块茎流水冲洗30-40min，无菌条件下，用去离子水冲洗2-3次，再用70-75％的乙醇消毒2-3min后用无菌去离子水冲洗2-4次，然后用0.1-0.2％的氯化汞溶液浸泡5-8min，最后用无菌去离子水冲洗2-3次。

紫色马铃薯的品种为“转心乌”或“黑金刚”。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明将常规的紫色马铃薯脱分化和再分化的培养基进行了简化，只需要一种分化培养基，分两次培养，即可完成脱分化和再分化的过程，且通过选择合适的外植体，改进培养基，大大的降低了污染率，提高了愈伤成苗率，降低了组培苗的病毒携带率。污染率降低到了2％以下，愈伤分化成苗率达到了83％以上，幼苗的病毒携带率降低到了0.7％以下。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1：以紫色马铃薯“转心乌”为实验材料

1、培养基的配置

(1)分化培养基：MS培养基+1.5mg/L NAA+4.5mg/L 6-BA+30g糖/L+7g/L琼脂。