[发明专利]一种李斯特菌化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种李斯特菌的化学发光检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括：偶联有李斯特菌捕获抗体的磁颗粒、吖啶酯标记的李斯特菌检测抗体、李斯特菌系列标准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B、清洗液。本发明试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术。与现有检测李斯特菌的技术相比，本试剂盒具有灵敏度高，信噪比高，快速检测的优点。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体是一种李斯特菌化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

李斯特菌，又名单核球增多性李斯特菌、李氏菌，是一种兼性厌氧细菌，为李斯特菌症的病原体，是革兰氏阳性菌。它广泛存在于自然界中，主要以食物为传染媒介，如肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等，是最致命的食源性病原体之一 。

在众多李斯特菌种类中，单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。单增李斯特菌进入人体是否得病与菌量和宿主的年龄免疫状态有关，因为该菌是一种细胞内寄生菌，宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能，因此，易感者为新生儿、孕妇、40岁以上的成人，免疫功能缺陷者。

目前，检测李斯特菌属和单增李斯特菌主要有平板培养法、聚合酶链式反应法(PCR)、酶联免疫方法(ELISA)和胶体金法。培养法检测菌类，虽然具有较高的敏感性和特异性，但是因细胞培养技术难度较高，测定时间长，故在常规临床微生物实验室无法普及。酶联免疫方法，采用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记物，其酶标记物易失活，显色底物见光易分解，灵敏度低，对结构类似的化合物具有一定的交叉反应，造成测试结果不准确。其中，胶体金法测定李斯特菌的检测方法，对抗体亲和力的要求较高，并且对其检测方法的交叉反应难以达到要求。

CN 106093410 A（2016.11）公开了一种胶体金免疫分析测定李斯特菌单克隆抗体的测定方法。其试剂盒最后检测结果是以肉眼可见的颜色对结果进行判读，误差较大，并且操作繁琐，流程较多，易出现误差，并且其灵敏度低。

CN 103941011 A（2014.07）公开了一种采用酶联免疫检测单核细胞增生性李斯特菌的方法，该试剂盒采用固相载体包被李斯特菌单克隆抗体，辣根过氧化物酶标记李斯特菌单克隆抗体，采用辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。而本公司开发的一种李斯特菌化学发光试剂盒，采用吖啶酯作为标记物，具有检测稳定、测量快速、灵敏度高的优点。

化学发光方法较其他方法的优点在于检测的简单性。

该体系采用磁分离体系，吖啶酯标记的化学发光技术进行检测，其具有的优点是：吖啶酯作为发光剂不需催化剂的存在，在有过氧化氢的稀碱溶液中即能发光；吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，可提高系统整体灵敏度，反应迅速；背景低、信噪比高，是一类有效的化学发光标记物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的李斯特菌的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种李斯特菌的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，本发明所提供的磁微粒化学发光方法检测李斯特菌的试剂盒，采用磁微粒偶联李斯特菌捕获抗体，吖啶酯标记李斯特菌检测抗体。试剂盒还包括李斯特菌校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

本发明所述磁珠的内核为四氧化三铁或三氧化二铁，所述磁珠的表面修饰基团为羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。