[发明专利]一种改进的Golgi‑Cox染色制备脑组织石蜡切片的方法

说明书

技术领域

本发明属于神经组织染色、制片领域，具体涉及一种改进的Golgi-Cox染色制备脑组织石蜡切片的方法，其特点是简易和高效。

背景技术

高尔基染色法作为神经组织学的一种经典染色方法，可以清晰揭露神经元精细的形态结构，如胞体、轴突、树突及树突棘等，是定性定量分析神经元形态的重要手段。

目前，Golgi-Cox染色法、Golgi-Kopsch法及快速高尔基染色法是三种被广泛应用的神经元染色方法。其中，Golgi-Cox法由于染色结果稳定、背景颜色干扰小等优点而应用最广泛。

但传统的Golgi-Cox法有以下缺点：

(1)操作流程繁琐、耗时。整个过程包括Golgi-Cox溶液的配制(2天)、脑组织样品浸染(14天)、脑组织脱水及切片制样(3天)、切片晾干(1-3天)、切片显影、脱水、透明及封片处理。整个实验过程耗时长达约一个月，大大影响了实验进度，限制了Golgi-Cox法的应用；

(2)脑组织样品在Golgi-Cox溶液中浸染14天后变得很脆弱，无论是使用振动切片还是冰冻切片技术，均产生严重的碎片、裂片问题，导致脑片不完整，从而影响后续神经元的形态分析；

(3)Golgi-Cox溶液含有大量重金属成分，脑组织样品在Golgi-Cox溶液浸染期间，隔6小时或者一到两天后需要更换新鲜Golgi-Cox溶液，不仅耗量大、操作繁琐，而且废液处理过程中容易造成二次环境污染问题；

(4)由于传统制作方法中脑片的厚度较大，在显影过程中，掉片问题严重。这也是让实验者头疼的一个问题。

详细的Golgi-Cox染色操作流程于1981年公开发表，随后在1986年科学家开始应用冷冻切片制样法获得脑组织切片，1998年发展成振动切片制样法。目前，冰冻切片制样法及振动切片制样法是Golgi-Cox染色制得脑组织切片的两种应用最广泛的手段。

当前很多市售的高尔基染色试剂盒是基于传统的Golgi-Cox染色法发展而来的，比如国外生产的“HITO GOLGI-COX OPTIMSTAIN^TM PREKIT”和“FD快速高尔基染色试剂盒”，除了价格高、染色时间较长(2周)外，后期还局限于冰冻切片机及振动切片机制样。因此这两种制样法均有很大的局限性：冰冻切片机制作高尔基染色的脑组织切片时特别容易产生碎片、裂片问题，即使是熟手操作也难以避免；振动切片机则价格高昂，一般实验室难以负担。并且由于振动切片机一般更多用于制作活性切片，因此如将振动切片机同时应用于高尔基染色切片制样，过程中产生的交叉污染问题会影响对脑片活性要求较高的实验结果，因此限制了高尔基染色实验的顺利进行和普及。

而常规的石蜡切片技术因其繁琐的前处理步骤及后期难控的切片透明操作，使得切片的完整性难以保证，神经元损伤严重，从而影响其形态学分析，因此，高尔基染色的常规石蜡切片制样法没有得到广大科研人员的广泛采用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有Golgi-Cox染色法存在的缺点与不足，提供一种改进的Golgi-Cox染色制备脑组织石蜡切片的方法，其中的染色方法可以清晰显示神经元的形态特征，具有快速、经济、高质量的特点。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种制备脑组织石蜡切片的方法，包括以下步骤：

(1)配制Golgi-Cox快速染色工作液并进行脑组织快速染色

等体积混合A液、B液和C液，避光静置1-2天，分层后取上清作为工作液；将脑组织浸泡在工作液中，37℃恒温避光浸染2天；

所述的A液是5％(W/V)重铬酸钾水溶液，B液是5％(W/V)氯化汞水溶液，C液是5％(W/V)铬酸钾水溶液；

Golgi-Cox的染色机理至今还不是很确切，当前大家公认的可能机理是：汞在铬酸盐的帮助下与蛋白质结合，白色的汞和硫代硫酸钠发生反应产生黑色的硫化汞从而可视。