[发明专利]一种改进的Golgi‑Cox染色制备脑组织石蜡切片的方法

权利要求书

1.一种制备脑组织石蜡切片的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)等体积混合A液、B液和C液，避光静置1-2天，分层后取上清作为工作液；将脑组织浸泡在工作液中，37℃恒温避光浸染2天；

所述的A液是5％(W/V)重铬酸钾水溶液，B液是5％(W/V)氯化汞水溶液，C液是5％(W/V)铬酸钾水溶液；

(2)取300g蔗糖、10g聚乙烯吡咯烷酮、300mL乙二醇与500mL 0.1M的PBS缓冲液混合，加水定容至1000mL，为高尔基保护液；将染色后的脑组织转移至高尔基保护液中，4℃放置4-7天，每天更换保护液；

(3)脑组织的石蜡浸蜡、包埋和切片；

(4)石蜡切片的显色、脱水、透明和封片处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)所述的石蜡浸蜡、包埋，是将脑组织置于石蜡自动包埋仪中，浸蜡4h以上，然后包埋，冷却后置于-20℃过夜保存。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)所述的切片包括以下步骤：

使用全自动轮转式切片机，切片厚度调至150-250μm，利用毛笔刷将切片移至3％明胶溶液包埋的载玻片上，阴凉无尘处避光放置1-3天。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的步骤(4)是将石蜡切片用双蒸水洗涤1-2min，接着用14％氨水浸泡30min；双蒸水洗涤2-3次，每次30s-2min；5％硫代硫酸钠处理10min；双蒸水洗涤1-2次，每次30s-2min；将切片分别置于50％、75％、95％的乙醇溶液中，脱水各4min，再于100％乙醇中浸泡2次，每次4min；将切片转移于等体积的100％乙醇、二甲苯、丙酮或氯仿混合液中，透明15min；最后用中性树胶封片。