[发明专利]一种均一组分低聚原花青素的制备方法

说明书

本发明提供一种均一组分低聚原花青素的制备方法，包括步骤：将经灭菌的含有原花青素的物料粉末加入水中，接种微生物进行发酵；然后经提取、脱脂、萃取、干燥得原花青素粗品；然后将原花青素粗品溶于溶剂a中，过树脂柱，经洗脱、除去洗脱液、冻干得低聚原花青素。本发明方法得到的低聚原花青素纯度高、产率高、聚合度均一、平均聚合度较小。

技术领域

本发明涉及一种天然原花青素的制备方法，特别涉及一种均一组分低聚原花青素的制备方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

原花青素(Proanthocyanidin，简称PC)是广泛存在于植物中的多酚类化合物，是缩合单宁中的一种，由不同数量的黄烷醇类单体儿茶素(Catechin,C)、表儿茶素(Epicatechin,EC)、儿茶素没食子酸酯(Catechin-3-O-gallate,CG)和表儿茶素没食子酸酯(Epicatechin-3-O-gallate,ECG)缩合而成，形成二聚体直至十五聚体化合物。通常将二至四聚体称为低聚原花青素(OPC)，将五聚体以上称为高聚原花青素(PPC)。原花青素资源分布广泛，存在于葡萄、花生、松树皮、茶叶、苹果、白桦树、银杏、莲房等植物部位中，法国教授Jaeques Masquelier于1951年首次从海松树皮中成功提取出原花青素，上世纪70年代又从葡萄籽中分离得到，这是目前主要的原花青素的来源。

原花青素因其突出的抗氧化活性而被广泛关注，是国际公认的清除人体自由基最有效的天然抗氧化剂，其抗氧化活性远远高于维生素C和维生素E，约为V_E的50倍，V_C的20倍。此外，还发现原花青素可以有效降低胆固醇和低密度脂蛋白水平，预防血栓形成，有助于预防心脑血管病的发生。且原花青素是一种毒性低，非常安全的物质，毒理实验表明，大鼠灌胃葡萄籽提取物，LD50在4000mg/kg以上，且连续灌胃60mg/kg●d 6个月无任何副作用且耐受性良好，无致畸致突变作用。目前原花青素已成为医药、保健品中的重要添加剂产品，由于其高效的抗氧化活性，在清除自由基和抗衰老方面尤其受消费者的青睐。

在原花青素中，OPC的活性，尤其是二聚体和三聚体要远大于高聚体PPC。且由于PPC结构复杂，且聚合度越大，水溶性越差，不易于人体吸收，降低了生物利用率，同时PPC存在较高的收敛性，口感较差，在实际应用中制约了原花青素的发展。迄今为止已有大量文献和专利报道制备原花青素。如，中国专利文献CN1454896A公开了一种葡萄籽低聚原花青素的提取方法，该方法首先是将葡萄籽进行粉碎、过筛、脱脂，再经含无机矿酸的有机溶剂提取、过滤、无机碱中和、过滤、减压浓缩后即可得到原花青素粗提物，再将粗提物中加入石油醚或三氯甲烷，放置、过滤、干燥得到精制原花青素；虽然该发明能够得到低聚原花青素，但该发明没有对复杂的原花青素组分进行分离，得到的原青花素聚合度不够均一，且虽是低聚原花青素，但聚合度还是偏高，且产率较低。又如，中国专利文献CN102690858A公开一种葡萄籽原花青素的制备方法，首先制备康宁木霉和黑曲霉直投式发酵剂，然后将葡萄籽经加水磨浆、加葡萄糖配料、高温灭菌、接菌发酵、离心除渣、超滤提取、干燥等工艺制成葡萄籽原花青素；但该发明发酵剂的制备步骤繁琐，成本较高，最后得到的原花青素聚合度不均一。

发明内容

针对现有技术存在的问题，为提高原花青素聚合度的均一性，降低平均聚合度，本发明提供一种均一组分低聚原花青素的制备方法；本发明方法得到的低聚原花青素纯度高、产率高、聚合度均一、平均聚合度较小。

本发明的技术方案如下：

一种均一组分低聚原花青素的制备方法，包括步骤：

(1)将经灭菌的含有原花青素的物料粉末加入水中，混合均匀得混合物；然后接种微生物进行发酵得发酵物料；所述微生物为米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉(Trichoderma viride)、黑曲霉、根霉或白腐真菌中的一种或两种以上的组合；