[发明专利]一种在脊髓损伤鼠模型中示踪移植的嗅鞘细胞的方法

说明书

本发明公开了一种在脊髓损伤鼠模型中示踪移植的嗅鞘细胞的方法，将量子点稀释到无血清培养基中，在细胞培养箱内孵育；将含有量子点的无血清培养液洗出，磷酸盐缓冲液清洗，然后更换成含胎牛血清的培养基。本发明的有益效果是能够简单、快速地完成示踪剂对于干细胞的标记。

技术领域

本发明属于医学技术领域，涉及一种在脊髓损伤鼠模型中示踪移植的嗅鞘细胞的方法。

背景技术

近年来，细胞移植治疗脊髓损伤成为研究的热点，并取得了丰硕的成果。但是尽管大量的临床试验研究证实嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤取得了较好的疗效,仍有人对此持有怀疑态度。嗅鞘细胞的临床治疗仍然是存在争议的，缺乏实质性的证据。并且在将嗅鞘细胞应用于临床治疗前，仍有很多实际问题需解决，诸如嗅鞘细胞的来源问题、治疗时机、是否能调节炎症反应、以及移植在活体内的疗效等等。如果能在活体内直接动态的观察到移植嗅鞘细胞的存活、增殖、分化、迁移，那么很多疑难问题都会迎刃而解。目前常用的嗅鞘细胞示踪剂包括超顺磁性氧化铁、放射性核素以及荧光报告基因如绿色荧光蛋白等。虽然这些示踪剂在嗅鞘细胞标记方面研究取得了一定的进展，但是也存在很多问题诸如，细胞毒性高、标记步骤繁琐等。其最主要的问题在于上述方法无法在较长时间内示踪移植入体内的干细胞。目前干细胞示踪剂主要存在的问题是标记步骤繁琐、耗时，而且示踪失效较短，无法实现在较长时间内示踪移植入体内的干细胞的迁移、分布等生物学行为。

发明内容

本发明的目的在于提供一种在脊髓损伤鼠模型中示踪移植的嗅鞘细胞的方法，解决了目前干细胞示踪剂标记步骤繁琐、而且示踪失效较短，无法实现在较长时间内示踪移植入体内的干细胞的迁移、分布的问题。

本发明所采用的技术方案是按照以下步骤进行：

步骤1：将量子点稀释到无血清培养基中，在细胞培养箱内孵育；

步骤2：将含有量子点的无血清培养液洗出，磷酸盐缓冲液清洗，然后更换成含胎牛血清的培养基。

进一步，量子点为磷化铟/硫化锌荧光量子点。

进一步，步骤1中量子点按10nM的浓度稀释到无血清培养基中；细胞培养箱内37℃，5％CO₂，孵育时间2小时。

进一步，步骤2中磷酸盐缓冲液清洗3遍；更换的培养基含10％胎牛血清。

本发明的有益效果是能够简单、快速地完成示踪剂对于干细胞的标记。

附图说明

图1是量子点-蛋白冕复合物阻止细胞对于量子点的胞吞示意图。

图中，1.量子点，2.细胞，3.血清中的蛋白成分，4.量子点-蛋白冕复合物。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明方法步骤如下：

步骤1：将磷化铟/硫化锌荧光量子点按10nM的浓度稀释到无血清培养基中，在细胞培养箱(37℃5％CO₂)内孵育2h。

步骤2：将含有磷化铟/硫化锌荧光量子点的无血清培养液洗出，磷酸盐缓冲液(PBS)清洗3遍，更换成含10％胎牛血清(FBS)的培养基。