[发明专利]一种粪便保存液及其应用

说明书

本发明公开了一种粪便保存液及其应用。本发明的粪便保存液利用乙醇作为固定剂、柠檬酸钠作为固定辅助剂、EDTA‑二钠为抗凝剂、Tris‑HCl为缓冲液、NaCl为离子强度维持剂，并配方有十二烷基硫酸钠，经过合理组方，能够稳定粪便样品中微生物的数量、组成和丰度，可以保证人肠道菌群测序分析的准确性，实现粪便样本的常温保存，相对于现有的保存液，不仅保存效果好，而且不含有硫氰酸胍等有毒成分，操作更安全。

技术领域

本发明属于微生物检测领域，涉及一种粪便保存液及其应用。

背景技术

肠道微生物是指动物肠道中存在的数量庞大的微生物，这群微生物依靠动物的肠道生活，同时帮助寄主完成多种生理生化功能。传统的肠道微生物研究，主要通过DGGE、FISH、qPCR等方法，随着测序技术的发展，肠道宏基因组测序已成为研究肠道微生物的有力手段。肠道宏基因组测序可以分析肠道菌群的组成、多样性和相对丰度，进而分析微生物与肠道微环境、疾病、药物、治疗之间的关系，还能发现具有特定功能的基因。肠道宏基因组测序又分为扩增子测序和全基因组测序，其中扩增子测序可以通过对人体肠道菌群16S rRNA基因可变区域进行扩增，对得到的扩增子进行测序和生物信息分析，获得肠道菌群的组成、多样性和相对丰度等信息。

肠道微生物在离体后，因取样地点与实验条件的限制，无法进行及时的核酸提取，会导致菌群的数量、种类及丰度发生变化，粪便是提取肠道微生物核酸的来源，如何在收集粪便后保证肠道菌群的稳定，是提高肠道宏基因组测序分析准确性的关键。传统采用冷藏法保存粪便，即粪便采集后存放于-20℃或更低的温度中，使其中的肠道微生物处于低代谢速率下，在一段时间内稳定菌群的数量与组成，然而冷藏法依然受限于采样条件，对于样品运输来说需要更高的成本，并且保存质量会因为是否冷藏及时产生较大的影响。因此，开发一种能够有效保持粪便样品中肠道菌群的稳定性，且无毒或腐蚀成分，不妨碍下游检测，操作安全方便的粪便保存液，具有很高的市场价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种粪便保存液，包括：固定剂60％～70％(v/v)、固定辅助剂0.5％～1％(w/v)、抗凝剂1％～2％(w/v)、缓冲液2～20mM、离子强度维持剂0.5％～1％(w/v)、十二烷基硫酸钠0.01％～0.1％(w/v)，余量为水。

优选的，所述固定剂为乙醇。

优选的，所述固定辅助剂选自柠檬酸盐。

优选的，所述十二烷基硫酸钠含量为0.02％～0.05％(w/v)。

其中，抗凝剂选自EDTA及其可溶性盐；缓冲液选自Tris-HCl、磷酸盐缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液；离子强度维持剂选自氯化钠、氯化钾。

更进一步优选的，一种粪便保存液，包括：乙醇60％～70％(v/v)、柠檬酸盐0.5％～1％(w/v)、EDTA-二钠1％～2％(w/v)、Tris-HCl 2～20mM、NaCl 0.5％～1％(w/v)、十二烷基硫酸钠0.01％～0.1％(w/v)，余量为水。

作为一种示例，所述粪便保存液包括：乙醇60％(v/v)、柠檬酸钠0.74％(w/v)、EDTA-二钠1.5％(w/v)、Tris-HCl 10mM、NaCl 0.9％(w/v)、十二烷基硫酸钠0.05％(w/v)，余量为水。

作为一种示例，所述粪便保存液包括：乙醇70％(v/v)、柠檬酸钠1％(w/v)、EDTA-二钠1.86％(w/v)、Tris-HCl 10mM、NaCl 0.75％(w/v)、十二烷基硫酸钠0.02％(w/v)，余量为水。

作为上述优选的方式，所述粪便保存液的pH为7.5～8。

本发明的又一目的在于提供上述的粪便保存液的制备方法，将配方中难溶于固定剂的组分用水溶解，再加入固定剂，最后用水定容，调节pH后，灭菌即得粪便保存液。