[发明专利]金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒提取循环肿瘤DNA的方法

说明书

本发明提供一种金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒提取循环肿瘤DNA的方法，属生物技术领域。本发明采用分散固相萃取模式，具体步骤如下：1)先采用上样液平衡DNA富集材料，将该DNA富集材料与生物样品以质量比为100‑1000:1混合，孵化0.5分钟‑12小时，过滤或者离心分离，弃上层清液，收集沉淀；2)采用pH1‑6洗涤液，过滤或者离心分离，收集上层清液，得DNA，上述整个过程在10‑60℃进行，所述DNA富集材料为金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒材料金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒材料。本发明的方法在提取循环肿瘤DNA方面表现出了高选择性和高通量等特点，可以实现循环肿瘤DNA的有效分离和富集。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒提取循环肿瘤DNA的方法。

背景技术

循环肿瘤DNA，即ctDNA(circulating tumor DNA)，是指肿瘤细胞经过细胞凋亡或者坏死产生的DNA片段释放进入循环系统。ctDNA存在于血液、滑膜液和脑脊液等体液中。由于ctDNA半衰期为1小时左右，能准确反映肿瘤当前情况，所以ctDNA可以作为组织活检的非侵入性替代方案。另外，ctDNA在癌症早期诊断、预后和测定药物治疗反应中发挥作用。

目前主流的ctDNA突变检测技术包括基于PCR扩增技术和基于DNA序列检测技术两类。但是不管哪种测序技术，都需要都对DNA进行富集和提取，以降低对扩增或者后续测序的干扰。

ctDNA的主要提取方法主要是基于硅球、磁性小球的固相萃取方法和基于苯酚-氯仿的液液提取方法。主要问题是提取效率和重新性。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒提取循环肿瘤DNA的方法。

一种金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒提取循环肿瘤DNA的方法，采用分散固相萃取模式，具体步骤如下：

1)先采用上样液平衡DNA富集材料，将该DNA富集材料与生物样品以质量比为100-1000:1混合，孵化0.5分钟-12小时，过滤或者离心分离，弃上混合层清液，收集沉淀；

2)采用pH 1-6清洗液与沉淀混合，孵化0.5分钟-60分钟，，过滤或者离心分离，弃上层清液，收集沉淀；

3)采用pH 8-13洗脱液与沉淀混合，孵化0.5分钟-60分钟，过滤或者离心分离，收集上清液，得ctDNA，上述整个过程在10-60℃进行，

所述DNA富集材料为种金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒材料。

所述金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒材料，其内核为金属纳米颗粒，其外壳的结构式为如下所示：

所述金属为Ag,Ti,Fe,Ga,Ni,Au,Pd或Pt。

所述生物样品为血液、滑膜液、脑脊液或尿液。

所述上样液为有机溶剂、有机酸和水的混合液，有机溶剂为乙腈、甲醇或乙醇，有机酸为甲酸、乙酸或三氟乙酸，有机溶剂体积浓度为50-90％，pH＝1-6。

所述清洗液为有机溶剂、有机酸和水的混合液，有机溶剂为乙腈、甲醇或乙醇，有机酸为甲酸、乙酸或三氟乙酸，有机溶剂体积浓度为50-90％，pH＝1-6。所述洗脱液为有机溶剂、有机碱和水的混合液，有机溶剂为乙腈、甲醇或乙醇，有机酸为氨水或三乙胺，有机溶剂体积浓度为10-50％，pH＝8-13。

本发明的有益效果为：本发明方法提取循环肿瘤DNA表现出了高选择性和高通量等特点，可以实现循环肿瘤DNA的有效分离和富集。

附图说明

图1为本发明一种金属内核/碳壳层结构的纳米颗粒材料的制备示意图。

具体实施方式