[发明专利]一种核酸提取和检测的试剂装置、试剂及方法

说明书

本发明揭示了一种核酸提取和检测的试剂装置、试剂及方法，所述试剂装置包括核酸提取腔室和核酸检测腔室，所述核酸提取腔室内预封装有用于核酸提取及纯化的第一试剂，所述核酸检测腔室内预封装有用于核酸检测的第二试剂，所述第一试剂包括细胞裂解液、核酸洗涤液及核酸洗脱液；所述第二试剂包括检测多种病原体的多种PCR冻干试剂，所述多种PCR冻干试剂包括多重PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、所述多种病原体的特异性引物及探针，以及内质控的特异性引物及探针。本发明能够在封闭的试剂装置内自动实现15种呼吸道病原体的提取、纯化和检测，且试剂的灵敏度高，操作简便，易于临床推广。

技术领域

本发明涉及一种核酸提取纯化领域，尤其是涉及一种在封闭系统内对多种病原体进行核酸提取和检测的装置、试剂及方法。

背景技术

急性呼吸道感染是最常见的传染性疾病之一，在发展中国家急性呼吸道疾病占急性发病的75％，其中80％的急性上呼吸道疾病和大部分下呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起的，其中以呼吸道病毒最为常见[1](Mahony JB.Detection of RespiratoryVirusesby Molecular Methods[J].Clinical Microbiology Reviews,2008,21(4):716-747.)。常见的呼吸道病毒包括：甲型流感病毒(Influenza A virus，FluA)、乙型流感病毒(Influenza B virus，FluB)、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus，RSV)、人偏肺病毒(Human Metapneumovirus，HMPV)、腺病毒(Adenovirus，AdV)、人鼻病毒和肠道病毒(Human rhinovirusHuman Enterovirus，HRVHEV)、副流感病毒1型(Parainfluenzavirus type 1，PIV1)、副流感病毒2型(Parainfluenza virus type 2，PIV2)、副流感病毒3型(Parainfluenza virus type 3，PIV3)等。除病毒外肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae，MP)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae，CP)、百日咳杆菌(Bordetellapertussis，BP)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae，Hi)、嗜肺军团菌(Legionellapneumophila，LP)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae，SP)等同样能够引起呼吸道感染，其中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎衣原体是引起儿童社区获得性肺炎的重要致病菌。呼吸道感染的临床表现易被认知，但引起呼吸道感染的病因却很难明确。能引起呼吸道感染的病原体包括病毒、细菌、支原体和衣原体等微生物。一种病原体可引起多种临床表现，而同一临床表现却可能是由多种不同病原体感染所引起的。在3岁以下的幼儿呼吸道感染中，常出现多种呼吸道病毒共同感染的情况[2](A Kaida.Associations between Co-Detected Respiratory Viruses in Children with Acute Respiratory Infections[J].Japanese Journal of Infectious Diseases,2014,67(6):469-475.)。呼吸道感染病原体的复杂性，导致临床上难以有目的的针对相应的病原体进行治疗，从而导致患者病情无改善，甚至病情加重。而盲目的使用抗生素也易导致抗生素的滥用等问题。近年来呼吸道病原体引发的疫情时常爆发，对公共卫生安全造成极大的危害。因此，建立一套简便、快速、准确、灵敏的呼吸道病原体检测试剂不仅对于呼吸道感染的临床诊断、针对性治疗以及避免抗生素的滥用等具有重要的意义；同时也对疫情病原体的传播途径的控制、人群的预防措施也具有重要的指导意义。

传统的呼吸道病原体的检测方法主要有：1)病原体的分离培养鉴定，2)病原体的抗原检测。其中：

1)病原体的分离培养鉴定是呼吸道病原体检测的重要技术手段，其优点是对实验室环境的硬件设备要求较低，且成本低廉。其缺点是培养鉴定过程繁琐、周期长、诊断效率低。