[发明专利]一种核酸提取和检测的试剂装置、试剂及方法

权利要求书

1.一种核酸提取和检测的试剂装置，其特征在于：所述试剂装置包括核酸提取腔室和核酸检测腔室，所述核酸提取腔室内预封装有用于核酸提取及纯化的第一试剂，所述核酸检测腔室内预封装有用于核酸检测的第二试剂，所述第一试剂包括细胞裂解液、核酸洗涤液及核酸洗脱液；所述第二试剂包括检测多种病原体的五种PCR试剂，所述五种PCR试剂包括多重PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、所述多种病原体的特异性引物及探针，以及内质控的特异性引物及探针；所述五种PCR试剂分别为封装于不同核酸检测腔室的第一PCR试剂，第二PCR试剂，第三PCR试剂，第四PCR试剂及第五PCR试剂；每份PCR试剂检测四个荧光检测通道，其中三个荧光通道检测三种不同的呼吸道病原体，另一个通道检测内质控，所述五种PCR试剂为PCR冻干试剂，

所述第一PCR试剂由多重PCR反应缓冲液、逆转录酶、DNA聚合酶、甲型流感病毒的特异性引物及探针、乙型流感病毒的特异性引物及探针、呼吸道合胞病毒的特异性引物及探针、内质控的特异性引物及探针组成；

所述第二PCR试剂包括由多重PCR反应缓冲液、逆转录酶、DNA聚合酶、人偏肺病毒的特异性引物及探针、腺病毒的特异性引物及探针、鼻病毒和肠病毒的特异性引物及探针、内质控的特异性引物及探针组成；

所述第三PCR试剂由多重PCR反应缓冲液、逆转录酶、DNA聚合酶、副流感病毒1型的特异性引物及探针、副流感病毒2型的特异性引物及探针、副流感病毒3型的特异性引物及探针、内质控的特异性引物及探针组成；

所述第四PCR试剂由多重PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、肺炎支原体的特异性引物及探针、肺炎衣原体的特异性引物及探针、百日咳杆菌的特异性引物及探针、内质控的特异性引物及探针组成；

所述第五PCR试剂由多重PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、流感嗜血杆菌的特异性引物及探针、嗜肺军团菌的特异性引物及探针、肺炎链球菌的特异性引物及探针、内质控的特异性引物及探针组成；

检测病原体的特异性引物及探针的序列为：

其中，F为上游引物序列，R为下游引物序列，P为双标记探针序列。

2.根据权利要求1所述的核酸提取和检测的 试剂装置，其特征在于：所述细胞裂解液，核酸洗涤液及核酸洗脱液分别封装于不同的一个或多个核酸提取腔室内。

3.根据权利要求1所述的核酸提取和检测的 试剂装置，其特征在于：

所述细胞裂解液包括：15～20mM的Tris-HCl、3～7mM的EDTA、0.05～0.08％的SDS、30～40％的TritonX-100，以及内质控质粒模板；

所述核酸洗涤液包括：5～10mM的Tris-HCl、0.1～0.5mM的EDTA及0.7％的NaCl；

所述核酸洗脱液包括1～5mM的Tris-HCl。

4.根据权利要求1所述的核酸提取和检测的 试剂装置，其特征在于：所述DNA聚合酶为2～3U，所述逆转录酶为5～10U，RNA酶抑制剂为5～10U。