[发明专利]一种蛋白药物的发酵生产工艺

说明书

本发明公开了一种蛋白药物的发酵生产工艺，其适合产业化发酵生产sDSS1蛋白药物，步骤包括：首先利用基因工程手段将sDSS1基因片段整合到表达质粒，整合基因片段中包含纯化标签；表达质粒经转化进入相应的表达宿主，构建高表达重组工程细胞；重组工程细胞经发酵、诱导表达、裂解、复性、酶切获得粗纯蛋白；继续进行一系列精细纯化步骤获得高纯度的sDSS1蛋白。本工艺经济有效。

技术领域

本发明涉及一种蛋白药物的发酵生产工艺，属于蛋白药物产业化制备技术领域。

背景技术

大规模且经济地获得高度纯化的目的蛋白对于生物医药产业来说是一个重要的课题。通常，天然提取的活性蛋白更加直接有效，但是受原料、蛋白丰度、纯化工艺等因素限制，天然提取的蛋白往往并不经济高效。对于常规蛋白药物，包括激素、疫苗、抗体、多肽等，利用哺乳动物细胞、细菌、酵母菌等大规模发酵生产提供了一个更加经济高效的途径，并且极大地降低了药物成本。但是，对于活性蛋白，由于蛋白质本身易于发生反应，无论是发酵生产的表达效率和蛋白质纯化的效率都受到显著的影响。要将所需的活性蛋白质与细胞裂解液或发酵液进行分离纯化，达到足够临床使用的纯度和安全标准，并且尽可能的降低成本，这些是目前产业界面临的难题。

Shfm1(split hand/split foot malformation type 1)基因是人蟹爪病中的关键基因之一，进化上高度保守，它所编码的蛋白DSS1参与到稳定基因组、同源基因重组、DNA损伤修复和细胞增殖等过程[1-4]。本专利发明人的研究结果显示DSS1蛋白作为标签可以通过耗能的酶促反应添加到氧化蛋白上，帮助细胞清除氧化蛋白[5]。这些结果显示DSS1蛋白在生物活动中的重要作用。sDSS1蛋白是最新发现的DSS1蛋白亚型，二者在氨基酸序列上有部分相似性，但是多肽结构完全不同。作为一种新型天然蛋白，sDSS1在氨基酸序列和多肽结构上的差异决定了它的功能更加特殊，因而有更大的潜在应用价值。目前尚未有资料报道针对sDSS1蛋白的发酵生产工艺。

以上内容涉及的引文：

1.Van Silfhout AT,van den Akker PC,Dijkhuizen T,Verheij JB,Olderode-Berends MJ,Kok K,Sikkema-Raddatz B,van Ravenswaaij-Arts CM(2009)Split hand/foot malformation due to chromosome 7q aberrations(SHFM1):additional supportfor functional haploinsufficiency as the causative mechanism.EurJ Hum Genet17(11):1432-8.

2.Li J,Zou C,Bai Y,Wazer DE,Band V,Gao Q(2006)DSS1is required for thestability of BRCA2.Oncogene 25:1186–1194.

3.Liu J,Doty T,Gibson B,Heyer WD(2010)Human BRCA2protein promotesRAD51filament formation on RPA-covered singlestranded DNA.Nat Struct Mol Biol17:1260–1262.

4.Zhou Q,Kojic M,Cao Z,Lisby M,Mazloum NA,Holloman WK(2007)Dss1interaction with Brh2as a regulatory mechanism for recombinationalrepair.Mol Cell Biol 2:2512–2526.