[发明专利]一种亲油包水固定化微生物载体及其制备方法

权利要求书

1.一种亲油包水固定化微生物载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备中间体双亲石墨烯

a.羧基化反应

称取2.0g石墨烯放入反应瓶中，加入5.0ml浓硝酸浸泡1h进行酸化处理引发羧基基团；

b.酰化反应

酸化后的材料加入8.0g亚硫酰氯进行酰化反应，放置于40℃恒温水浴摇床上以120rpm的速率反应1h，产物用去离子水洗涤至中性；

c.羟基化反应

向反应瓶中加入25ml乙二醇作为羟基源，放置于40℃恒温水浴摇床上以120rpm的速率反应1h，得到含羟基的石墨烯，在干燥箱内120℃烘干2h；

d.激发引发基团

继而向反应瓶中加入1ml 2-溴代异丁酰溴作为大分子引发剂用于激发引发基团，放置于40℃恒温水浴摇床上以120rpm的速率反应1h，得到ATRP反应所需的基团，产物用去离子水反复洗涤至中性，在干燥箱内烘干2h；

e.水解反应

向反应瓶中加入0.6g溴化铜和10m丙烯酸正丁酯，放置于40℃恒温水浴摇床上以120rpm的速率反应1h，发生水解反应，用去离子水洗涤至中性，在干燥箱内烘干1h；

f.疏水基团聚合反应

水解反应后，向反应瓶中加入10ml二氯甲烷和0.5ml三氟乙酸，放置于40℃恒温水浴摇床上以120rpm的速率反应1h，促使含双键疏水性的单体发生聚合，产物使用滤纸过滤，100ml去离子水洗涤,固态物在干燥箱内烘干1h，得到既含有亲油基团又含有亲水基团的双亲石墨烯材料；

(2)制备亲酯性高分子溶液

取一个反应瓶，加入1.5ml二乙烯基苯作为交联剂，加入5.0ml四氢呋喃作为极性调节剂，再加入0.5ml水作为致孔剂，最后向反应瓶中加入0.06g偶氮二异丁腈作为油溶性偶氮引发剂，放置于40℃恒温水浴摇床上以120rpm的速率混合20min，得到亲酯性有机高分子溶液；

(3)制备载体混合液

向合成釜中加入步骤(1)得到的含有亲油亲水基团的石墨烯0.8g，加入步骤(2)得到的亲酯性有机高分子溶液7.0ml，取天然无机物硅藻土0.5g，将合成釜放置于40℃恒温水浴摇床以120rpm的速度混合20min形成有机高分子和无机材料结合基质的载体混合液；

(4)合成固定化载体

将合成釜放置于真空干燥箱，在120℃条件下恒温干燥12h，得到亲油包水属性的固定化微生物载体；

(5)检测固定化载体的理化性能

检测合成的固定化微生物的载体的比表面积、疏水性、饱和吸油率、缓释吸油率。

2.一种由权利要求1所述制备方法制备的亲油包水固定化微生物载体。

3.一种权利要求2所述亲油包水固定化微生物载体在固定微生物中的用途，其特征在于，所述的固定化微生物载体固定的微生物为用于降解石油的泊库岛食烷菌。

4.根据权利要求3所述的亲油包水固定化微生物载体在固定微生物中的用途，其特征在于，固定化菌体的方法具体如下：

以泊库岛食烷菌作为模式菌株，使用2216E培养基用于泊库岛食烷菌的增菌培养，24℃里恒温培养1～3d，获得增菌培养的液体培养基，称取10g合成的固定化微生物载体，放入2％的H₂O₂溶液中浸泡30min，用去离子水洗涤至中性，得到洗涤后的固定化微生物载体；

将洗涤后的固定化微生物载体加入上述已培养1～3d的液体培养基中，继续培养1～3d，滤去培养液，得固定化的泊库岛食烷菌；

检测固定化微生物的降解效果。