[发明专利]一种检测苯甲醇乙酰转移酶活性的方法

权利要求书

1.一种检测苯甲醇乙酰转移酶活性的方法，其特征在于，包括：将待测蛋白样品、DTNB、乙酰辅酶A、苯甲醇、MgCl₂加入水中进行酶活反应，检测反应体系的吸光度，计算出巯基的生成量，进而计算出待测蛋白样品中苯甲醇乙酰转移酶的活性；

所述待测蛋白样品为组织粗提取蛋白或纯化蛋白；

所述酶活反应是在20-35℃水浴条件下进行；

所述检测反应体系的吸光度是以反应开始为起点，每隔10-30min检测一次，直至反应结束；

所述巯基的生成量的计算公式如下：

巯基含量(μmol/mg)＝73.53×(A_n-A₀)/C

其中，A_n为不同时间点反应体系在412nm波长的吸光度；

A₀为反应初始时间点0min，反应体系在412nm波长的吸光度；

C-蛋白样品量/mg；

n为检测时间；

所述苯甲醇乙酰转移酶的活性的计算如下：

以时间为横坐标，巯基含量为纵坐标，建立巯基含量随时间的变化曲线；根据线性区段的变化曲线计算线性区段的斜率，即为待测蛋白样品中苯甲醇乙酰转移酶的酶活性值。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测蛋白样品、DTNB、乙酰辅酶A、苯甲醇、MgCl₂的质量比为(100-5000)：(1480-5950)：(1510-12150)：(400-1630)：(3-15)。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述待测蛋白样品、DTNB、乙酰辅酶A、苯甲醇、MgCl₂的质量比为(100-5000)：(1486.32-5945.26)：(1517.95-12143.56)：(405.49-1621.96)：(3.57-14.28)。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述待测蛋白样品、DTNB、乙酰辅酶A、苯甲醇、MgCl₂的质量比为1000：(2970-2980)：(3030-3050)：(800-820)：(7-8)。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述待测蛋白样品、DTNB、乙酰辅酶A、苯甲醇、MgCl₂的质量比为1000：2972.63：3035.89：810.98：7.14。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述方法中，空白对照组是将实验组中待测蛋白样品替换为待测蛋白样品煮沸、离心后取得的上清液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述变化曲线中多个区域呈线性时，取第一个呈线性的区段。