[发明专利]一种高效液相检测灯盏花成分的方法

说明书

本发明属于医药领域，具体涉及一种高效液相检测灯盏花成分的方法，本发明所述检测方法，包括如下步骤(a)提供10种样品对照品溶液和供试样品溶液；(b)用HPLC‑VWD按外标法对步骤(a)供试样品溶液中的10种成分含量进行分析，其特征采用高效液相，以十八烷基硅烷键合胶为填充剂，色谱条件，色谱柱:未加保护柱EC‑C18 2.7μm，0.2%磷酸+5%乙腈为流动相A相，0.2%磷酸+40%甲醇+40%乙腈为有机相B相，6次线性梯度变换洗脱，流速1.000 mL/min，柱温40℃，检测波长335nm。测定了10种成分，停止时间30min，后运行6min。本发明增加了现有高效液相同时检测灯盏花成分，专属性强，快捷灵敏，准确，精密度好。通过该方法检测，可以提高灯盏花成分检测效率，节省资源。

技术领域

本发明提出一种高效液相检测灯盏花成分的方法。

背景技术

灯盏花是菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz的干燥全草，又名灯盏细辛、东菊，主要分布于我国西南地区，尤以云南较多。具有活血通络止痛，祛风散寒功效。灯盏乙素可通过多种机制实现其对急性脑缺血的明显保护作用：可抑制血小板聚集，抑制体内凝血功能和促进纤溶活性，从而抑制血栓形成；通过抑制蛋白激酶C激活所致的脑血管痉挛收缩，增加局部脑血流量，改善脑微循环，减少炎性细胞黏附浸润，保护缺血后脑组织，这些作用有利于治疗和预防心脑血管疾病。现代药理研究证明，灯盏花的主要活性成分为黄酮(苷) 及酚类成分，包括灯盏乙素(野黄芩苷)、绿原酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、4， 5-二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙等，对中风偏瘫、老年痴呆、脑缺血等心脑血管疾病有较好的疗效。

灯盏花具有很好的药用价值和广阔的医药市场发展空间，而同时检测多个成分的研究不多，张卫东等从灯盏花中分离出8个化合物(灯盏细辛化学成分的研究)，黄洪波等从灯盏花中提取分离得到7个化合物(灯盏花的化学成分研究)，李菁等从灯盏花中分离得到12个化合物(灯盏花化学成分研究)，其中一些化合物为首次鉴定出，存在方法复杂，不能完全从灯盏花中定量出等缺点。

发明内容

有鉴于现有技术存在的缺陷，本发明提供一种高效液相检测灯盏花成分的方法，该检测方法操作简单，重复性好，专属性强，准确度高，通过该方法检测有利于提高灯盏花成分定量准确度，节约材料。本发明的液相峰区分度均大于1.5，能很好的定量出灯盏花中的同分异构体化合物。

本发明另一个目的在于提供一种如权利要求1所描述的灯盏花高效液相色谱分析方法，在灯盏花栽培育种和药用资源检测中的应用。

本发明通过如下技术方案实现本发明的目的，一种高效液相检测灯盏花成分的方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤一，灯盏花对照品溶液配制；

步骤二，供测试品溶液处理；

步骤三，确定液相色谱条件；

所述步骤一为：

分别精密称取咖啡酸、绿原酸、灯盏乙素、异绿原酸B、异绿原酸A、1,5- 二咖啡酰奎宁酸，飞鹏酯乙、芹菜素，异绿原酸C和野黄芩素这10种成分的标准品10mg于10mL容量瓶中，用浓度70％甲醇溶解稀释至刻度，作为标准品储备液，分别量取所述10种成分的标准品储备液各1mL于10mL容量瓶混合，并用浓度70％甲醇稀释至刻度，摇匀，得到0.1mg/mL的对照品溶液；采用0.45μm 有机微孔滤膜过滤于液相进样瓶，进样；

所述步骤二为：

采摘灯盏花叶片，干燥箱烘干或自然风干，磨碎叶片，精密称取灯盏花粉末0.500g于100mL锥形瓶中，精密加入浓度70％甲醇50mL，浸泡过夜，于功率250W和频率40kHz超声下提取30分钟，用70％甲醇补足减失的体积，摇匀，转移溶液至离心管中离心，用1mL注射器取上清液过0.45μm有机微孔滤膜过滤于液相进样瓶，进样；

所述步骤三为：