[发明专利]合成钴（II）啉酸a，c-二酰胺的大肠杆菌重组菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种用于生产CBAD(钴（II）啉酸a，c-二酰胺)或其前体的工程菌，其特征在于，所述工程菌为大肠杆菌，并且所述工程菌含有外源的基因模块(gene module)，所述的基因模块包括：

(a) 尿卟啉原III基因模块，所述尿卟啉原III基因模块表达用于生物合成尿卟啉原III的基因，

其中，所述用于生物合成尿卟啉原III的基因包括：hemA或hemO基因、hemB基因、hemC基因、和hemD基因，

并且，所述hemA基因来源于S. meliloti 菌株、或R. palustri菌株，所述hemO基因来源于R. palustri菌株，所述hemB基因、hemC基因和hemD基因来源于S. meliloti 菌株；

(b) HBA基因模块，所述HBA基因模块表达用于以尿卟啉原III为原料，生物合成HBA的基因；

(c) HBAD基因模块,所述HBAD基因模块表达用于以HBA为原料，生物合成HBAD的基因；

(d) CBAD基因模块，所述CBAD基因模块表达用于以HBAD为原料，生物合成CBAD的基因；

(e)钴吸收基因模块，所述钴吸收基因模块表达用于向胞内转运钴离子的转运蛋白的编码基因；和

(f)血红素途径弱化模块，所述血红素途径弱化模块用于下调血红素合成基因的表达，其中，所述的血红素合成基因包括：hemE基因、hemF基因、hemG基因、和/或hemH基因。

2.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌的内源基因endA被下调或缺失。

3.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述的尿卟啉原III基因模块整合在基因组上。

4.如权利要求3所述的工程菌，其特征在于，所述的尿卟啉原III基因模块整合于阿拉伯糖诱导的启动子P_BAD位点。

5.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述的用于生物合成HBA的基因包括：cobA基因、cobI基因、cobG基因、cobJ基因、cobM基因、cobF基因、cobK基因、cobL基因、和cobH基因。

6.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述的用于生物合成HBAD的基因包括：cobB基因。

7.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述的用于生物合成CBAD的基因包括：(i)cobN基因、cobS基因、cobT基因、cobW基因、或其组合，或(ii)cobN基因、chlI基因、chlD基因、cobW基因、或其组合。