[发明专利]一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法及其应用

说明书

本发明涉及一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法及其应用，使用含有离子液体的溶液来提取和溶解细胞中的膜蛋白质复合物，采用免疫沉淀方法获取目标膜蛋白质复合物，并可利用蛋白质免疫印迹法或质谱分析方法检测。该方法既能提高膜蛋白质复合物的提取能力，又能维持膜蛋白质复合物的稳定性，具有胰酶兼容性。本发明可应用于健康和疾病生物体的细胞中的膜蛋白质复合物的分析中。

技术领域

本发明涉及一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，提高蛋白质复合物，尤其是膜蛋白质复合物的提取效率，并可应用于健康和疾病生物体的细胞中的膜蛋白质复合物样品的分析中。

背景技术

膜蛋白质的种类繁多，多数膜蛋白质分子数目较少，但却赋予细胞膜非常重要的生物学功能。膜蛋白质通过许多疏水氨基酸残基锚定在膜结构里面，很难溶解在水性缓冲液系统中，具有丰度低、疏水性强、复合物易解离等问题。膜蛋白质的强疏水性，使得构成复合物的蛋白质性质差异显著，因此在确保提取效率的同时，现有提取溶剂体系很难保持膜蛋白质复合物结构的稳定性。膜蛋白质助溶剂，包括有机溶剂、有机酸、尿素和十二烷基磺酸钠等，都会在不同程度上破坏通过相互作用形成的膜蛋白质复合物，因此很难真实、有效的反映出膜蛋白质复合物的组成。

针对天然状态下膜蛋白质复合物难以提取的问题，通过发展基于新型溶剂体系的蛋白质复合物提取方法，提高蛋白复合物，尤其是膜蛋白质复合物的提取效率。近年来研究的离子液体是一种新兴的绿色溶剂，具有溶解能力强、热稳定性好、设计可控、极性可调等优点，作为有效的生物相容性介质，不仅可以稳定生物分子的天然结构，而且还可作为重折叠变性蛋白的添加剂。离子溶液中的蛋白质稳定性取决于蛋白质-离子和离子-离子相互作用之间的微妙平衡。离子液体对于膜蛋白质有着较强的溶解能力，在膜蛋白质提取方面有一定的优势(L.L.Sun,D.Y.Tao,B.Han,J.F.Ma,G.J.Zhu,Z.Liang,Y.C.Shan,L.Zhang,Y.K.Zhang.Ionic liquid 1-butyl-3-methyl imidazoliumtetrafluoroborate forshotgun membrane proteomics.Anal.Bioanal.Chem.,2011,399(10):3387-3397；Q.Zhao,F.Fang,Y.Liang,H.M.Yuan,Yang,K.G.Yang,Q.Wu,Z.Liang,L.H.Zhang,Y.K.Zhang.1-Dodecyl-3-methylimidazolium chloride-assisted sample preparation method forefficient integral membrane proteome analysis.Anal.Chem.,2014,86(15):7544-7550.)。在本发明中，我们利用离子液体溶剂体系提取膜蛋白质复合物，既能提高膜蛋白质复合物的溶解能力，又能维持膜蛋白质复合物的稳定性。

发明内容

为解决天然状态下膜蛋白质复合物难以提取的问题，本发明提供一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，提高蛋白质复合物，尤其是膜蛋白质复合物的提取效率，同时维持膜蛋白质复合物的稳定性。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：