[发明专利]一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法及其应用

权利要求书

1.一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：使用含离子液体的溶液对细胞进行裂解以获取膜蛋白质复合物，利用免疫沉淀方法获取目标膜蛋白质复合物，利用蛋白质免疫印迹法或质谱分析方法进行目标膜蛋白质复合物获取的检测。

2.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：具体过程包括：

(1)使用碱性缓冲溶液配制离子液体溶液，加入辅助添加剂，即为膜蛋白质复合物提取液；向细胞中加入膜蛋白质复合物提取液，并将细胞进行裂解，以提取和溶解细胞中的蛋白质复合物；

(2)将步骤(1)中所得的样品溶液收集后离心，获取蛋白质复合物，弃去细胞沉淀；

(3)将步骤(2)中获取的蛋白质复合物少量移取直接用于二喹啉甲酸法测浓度和蛋白质免疫印迹实验，检测对细胞中所含目标膜蛋白质复合物的提取效果；其余移取用于免疫沉淀方法获取目标膜蛋白质复合物，再进行蛋白质免疫印迹实验或质谱分析检测膜蛋白质复合物的稳定性。

3.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述的细胞，包括健康生物体的细胞和疾病生物体的细胞。

4.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述的膜蛋白质复合物提取液中，离子液体为阳离子部分为烷基链部分含1-100个碳的伯胺类、仲胺类、叔胺类或季铵类阳离子；阴离子部分为F^-、H₂PO₄^-、HPO₄^2-、PO₄^3-、HSO₄^-、SO₄^2-、Cl^-、NO₃^-、Br^-、ClO₃^-、HCOO^-、CH₃COO^-、CH₃CH₂COO^-或CH₃CH₂CH₂COO^-中的一种或两种以上；

离子液体的质量与碱性缓冲溶液的体积比百分数为3％-35％。

5.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述的膜蛋白质复合物提取液中的辅助添加剂，其特征在于：辅助添加剂为表面活性剂、蛋白酶抑制剂或电解质中的一种或两种以上；

表面活性剂为100(聚乙二醇辛基苯基醚)、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、吐温20、十二烷基麦芽糖苷、洋地黄皂苷或乙基苯基聚乙二醇；表面活性剂的质量与碱性缓冲溶液的体积之比百分数为0.1％-20％；

蛋白酶抑制剂为乙二胺四乙酸、焦磷酸钠、β-磷酸甘油、正钒酸钠、氟化钠或亮抑酶肽；蛋白酶抑制剂的物质的量与碱性缓冲溶液的体积之比为1-1000mM；

电解质为KCl、NaCl、CaCl₂或MgCl₂；电解质的物质的量与碱性缓冲溶液的体积之比为1-1000(mM：v)。

6.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述的膜蛋白质复合物提取液中，碱性缓冲溶液为pH为7.2-14的三羟甲基氨基甲烷缓冲盐溶液或磷酸缓冲盐溶液。

7.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：步骤(1)中所述的细胞裂解方法为化学裂解法。

8.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：步骤(3)中所述的免疫沉淀方法中需使用膜蛋白质复合物提取液清洗膜蛋白质复合物，清洗1-5次，每次100-1000ul。

9.按照权利要求1所述的一种基于离子液体的膜蛋白质复合物提取方法，其特征在于：该方法可应用于健康和疾病生物体的细胞中的膜蛋白质复合物的分析中。