[发明专利]硫堇嵌合氧化石墨烯在孕酮检测方面的应用及孕酮快速检测仪

权利要求书

1.硫堇嵌合氧化石墨烯在孕酮检测方面的应用，其特征在于，是应用于制作孕酮快速检测仪设置的免疫传感器的工作电极。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述硫堇嵌合氧化石墨烯作为复合膜材料附着于所述免疫传感器的工作电极表面，所述复合膜中氧化石墨烯浓度为1～5mgmL^-1，硫堇的浓度为1mmolL^-1。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述硫堇嵌合氧化石墨烯的制备方法为：将氧化石墨烯浓度为5mg/mL的氧化石墨烯悬浊液在冰水浴中超声处理后与浓度为2mmol/L的硫堇等体积混匀，室温下避光搅拌，离心，清洗，将产物干燥，即得到氧化石墨烯/硫堇复合物，在壳聚糖的醋酸溶液里复溶，备用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述超声处理时间为0.5h；所述室温下避光搅拌的时间为20min；所述离心的条件为4000r/min；所述干燥是在50℃下鼓风干燥。

5.一种基于电流型免疫传感器的孕酮快速检测仪，其特征在于，包括三电极系统、恒电位系统、信号检测与处理系统、电源系统和外部系统，所述三电极系统包括集工作电极、参比电极和辅助电极于一体的三电极免疫传感器，所述免疫传感器的工作电极表面有权利要求1至4任一项所述的硫堇-氧化石墨烯复合膜，所述工作电极上固定有孕酮包被原；所述恒电位系统通过恒电位电路向工作电极与参比电极之间提供输出范围0～1V，步进0.01V可调的稳定恒定工作电压，电压值由单片机及数模转换电路控制；免疫传感器产生的电流信号由辅助电极传向信号检测与处理系统，再通过单片机将模拟量信号转换成数字量信号，并在单片机中进行程序处理；所述单片机与外部系统控制连接。

6.根据权利要求5所述基于电流型免疫传感器的孕酮快速检测仪，其特征在于，所述外部系统包括显示与打印存储系统电路；所述电源系统包括电源、AC/DC整流变换器、DC/DC电源转换器；所述信号检测与处理系统采用多片LM386运放芯片、电容、电阻和二极管构成检测电路，对免疫传感器产生的电流信号进行I/V转换，放大，滤波。

7.根据权利要求5所述基于电流型免疫传感器的孕酮快速检测仪，其特征在于，所述恒电位系统中采用LM324多路运放芯片构成恒电位电路，所述恒电位系统提供的恒定电压大小由单片机输出数字信号经数模转化电路，再由恒电位电路向三电极系统提供输出范围0～1V，步进0.01V可调的恒定电压；

所述单片机采用STM8S208C8T6；所述数模转换电路是由DAC0832数模转化芯片构成的电路；所述三电极免疫传感器采用丝网印刷电极。

8.一种孕酮快速检测方法，其特征在于，是采用权利要求5至7任一项所述孕酮快速检测仪进行检测，包括以下步骤：

S1.取4℃保存的辣根过氧化酶-链霉亲合素/生物素化抗体溶液，用磷酸盐缓冲液稀释，然后取两份等体积的HRP-SA/biotinylated antibody溶液分别与等体积的磷酸盐缓冲液(空白组)和样液混合均匀，滴涂在预先处理好的丝印电极工作区域室温孵育，得待测液待测；

S2.将所述孕酮快速检测仪的免疫传感器放入步骤S1所得待测液中，测得在添加过氧化氢前后的电流分别为I₁，I₂和I₃，I₄；空白组的峰电流差ΔI₀(I₂-I₁)也可以采用系统默认值；

S3.通过孕酮快速检测仪的单片机微控制器上运行的检测程序自动计算出竞争结合率(I％)，计算公式如下：

S4.所述孕酮快速检测仪的单片机微控制器根据得到的竞争结合率做出定性结论，将结果送到人机界面显示，并将最后结果打印输出，数据同时一并进行存储。

9.一种权利要求5至7任一项所述孕酮快速检测仪操作使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

首先，将校准的免疫传感器放入测试溶液中进行检测准备；然后，按下仪器开关键，系统初始化后进入主界面，人机界面上设计有校准、检测、复位、保存、打印、帮助和△I₀计算、△I计算、浓度计算、绘制十个软触按键；第一次点击校准按键，开始检测并显示读数I₁；在测试溶液中加入30μL 0.48mmol L^-1H₂O₂后，第二次点击校准之后，观察提示，显示读数I₂；点击保存按键，可对数据进行保存；第一次点击检测按键，开始检测并显示读数I₃；在测试溶液中加入30μL0.48mmol L^-1H₂O₂后，第二次点击检测之后，观察提示，显示结果I₄；点击保存按键，可对数据进行保存；点击△I₀计算按键与△I计算按键可自动计算出ΔI₀(I₂-I₁)和ΔI(I₄-I₃)；通过两个电流差自动计算该样品液对标记抗体的竞争结合率，通过两个电流差自动计算该样品液中孕酮对抗体的竞争结合率，点击保存按键，对数据进行保存；点击绘制按键，根据已保存的数据自动进行关系曲线图的绘制；重复上述检测操作，点击检测按键，界面会显示两个电流值，点击绘制按键，系统出现浓度与电流值关系曲线，点击浓度计算，系统自动计算出提取液的目标孕酮浓度，最后自动生成测定结果报告；按下打印键，将印有前后两次检测电压、孕酮竞争结合率以及孕酮检测浓度的数据进行打印输出。