[发明专利]霉菌毒素吸附剂吸附效果评估方法

说明书

本发明涉及一种霉菌毒素吸附剂吸附效果评估方法。包括以下步骤：将吸附剂在含霉菌毒素的人工胃消化液中避光反应1～2h模拟胃环境吸附，再在人工小肠消化液中避光反应1～2h模拟肠道环境吸附或解吸，再在pH为6～8的碱性水溶液中避光反应1～2h模拟肠道末端环境吸附或解吸，计算得到吸附剂的综合吸附率。本发明的评估方法综合考虑了吸附剂在动物体内的吸附情况，更加真实地评定吸附剂吸附脱毒效果，评估结果更为准确。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种利用液相色谱法评估霉菌毒素吸附剂体外脱毒效果的方法。

背景技术

霉菌毒素是霉菌的代谢次生物，普遍存在于饲料及其原料中。目前已知污染饲料的霉菌毒素约有100多种，主要为青霉菌属、曲霉菌属和镰刀菌属所产的多种霉菌毒素(计成，2007)，其中对畜禽危害较大的主要有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、烟曲霉毒素、单端孢毒素和玉米赤霉烯酮等。世界上至少有25％的谷物受到霉菌毒素的污染，对饲料业、畜牧业和人类健康造成严重危害。

国内外许多研究者对如何消除霉菌毒素对畜禽健康和生产性能的不良影响、降低霉菌毒素及其代谢产物在畜产品中的残留、保证畜产品安全等方面作了大量研究。在生产实践中，霉菌无法完全消除。使用防霉剂虽可有效防止饲料霉变，但不能降低已存在于饲料中的霉菌毒素含量(王若军，2003)，且膨化制粒等处理工艺也并不能达到降解霉菌毒素的目的。从技术角度考虑，目前不可能存在真正意义上的霉菌毒素降解剂或裂解剂。鉴于此，饲料中添加霉菌毒素吸附剂是降低霉菌毒素危害、提高动物生产性能的有效手段。

霉菌毒素吸附剂在动物的消化道内吸附霉菌毒素，减少毒素进入动物体内的数量，从而保护动物免受霉菌毒素毒害。

在霉菌毒素效果评估过程中使用最多是简单的体外等温吸附法。该方法以水作为反应介质，根据吸附剂和毒素间的剂量反应关系，经分离固体吸附剂后，测定液相中剩余毒素的量，计算被吸收的量。通过评估吸附剂的吸附效果，预估饲料中需要加入的霉菌毒素吸附剂的量。

孙育荣等(CN105301134A)公开了一种利用液相色谱法评估霉菌毒素脱毒剂体外脱毒效果的方法，其利用用动物的消化道食糜上清液为反应介质，来评定吸附剂吸附效果。该方法只采用胃环境或肠环境，只是模拟一个环境，粗略估算一下效果，该方法只适合对吸附剂进行快速的初步筛选。

刘媛婷等(《霉菌毒素吸附剂对黄曲霉毒素B1吸附特性及效果研究》，四川农业大学)公开了吸附剂在体外和体内条件下对AFB1的吸附特性，研究了不同pH值(2.0、5.0、6.0和8.0)环境下吸附剂对AFB1的吸附能力，以及不同酸碱条件对吸附剂-AFB1复合体稳定性的影响。采用吸附剂在pH2.0的PBS溶液中吸附反应结束后，又向残渣中加入pH8.0的PBS溶液进行反应，通过ELisa法测定上清液中AFB1含量，计算吸附量/吸附率和解吸量/解吸率。该方法直接用pH8的水溶液虽然酸碱环境类似，但环境的成分不太符合，对结果有一定的影响。另外，该方法在前处理后采用了试剂盒的检测方法，试剂盒的准确性较低。

发明内容

目前现有技术中存在的技术问题是，现有方法对于霉菌毒素吸附剂的吸附效果评估准确度有待进一步提高。

本发明人为解决上述技术问题发现，光照和滤膜对于利用吸附剂最终吸附量的测定有很大影响。以往技术文献均没有考虑到这些影响因素，因此测试结果偏差很大。

正常条件下，食糜在动物消化道内流动要经历从酸性胃环境进入弱碱性肠道环境，进入肠道后，其中的营养物质及有害成分因不断被吸收而浓度逐渐下降。为了探索吸附剂在胃内(酸性环境)吸附毒物或营养成分后是否会在肠道(碱性环境)中释放，本发明考虑了吸附剂进入体内先经过胃液环境，在肠液环境中的可能解吸；也考虑了进入胃环境后，在肠环境中可能发生再吸收，以及在肠道环境末段可能发生的解吸过程。