[发明专利]一种在植物器官或组织中对激素进行整体定位检测的方法

权利要求书

1.一种在植物器官或组织中对激素进行整体定位检测的方法，其特征在于：所述方法不包括将待测植物的器官或组织制成切片的步骤；所述方法包括如下步骤：

(a)将所述待测植物的器官或组织置于交联液中进行处理，所述交联液中含有能够与靶标激素交联从而形成半抗原的物质；

(b)将经步骤(a)处理过的所述待测植物的器官或组织置于渗透液中进行处理，增加渗透性；

(c)对经步骤(b)处理过的所述待测植物的器官或组织进行一抗孵育和二抗孵育，所用一抗为抗所述靶标激素的抗体，所用二抗为抗所述一抗的抗体，然后进行显色反应，从而实现在所述待测植物的器官或组织中对所述靶标激素的整体定位检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，所述交联液的组成如下：每100mL所述交联液中含有3g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，余量为PBST；

和/或

步骤(a)中，将所述待测植物的器官或组织置于所述交联液中进行处理是按照包括如下步骤的方法进行的：将所述待测植物的器官或组织置于所述交联液中，2-8℃下黑暗中处理40-60分钟。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：在步骤(a)和步骤(b)之间还包括对所述待测植物的器官或组织进行固定和/或脱色素处理的步骤；

所述固定是利用4％PFA多聚甲醛固定液对所述待测植物的器官或组织进行固定；

所述脱色素处理是利用甲醇对所述待测植物的器官或组织进行脱色素。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

所述固定是按照包括如下步骤的方法进行的：将所述待测植物的器官或组织置于4％PFA多聚甲醛固定液中，4℃固定12-16h；

所述脱色素处理是按照包括如下步骤的方法进行的：将所述待测植物的器官或组织依次置于如下溶液中进行梯度置换：(a1)2％PFA多聚甲醛固定液，20min；(a2)PBST，20min；2次；(a3)PBST中添加体积百分含量为25％的甲醇后所得溶液，20min；(a4)PBST中添加体积百分含量为50％的甲醇后所得溶液，20min；(a5)PBST中添加体积百分含量为75％的甲醇后所得溶液，20min；(a6)100％甲醇，直到所述待测植物的器官或组织由绿色变为无色为止；(a7)甲醇：乙醇依次按体积比为3:1、2:1、1:1、1:2和1:3的比例混合后所得五份溶液，以及纯乙醇进行梯度置换，每级20min。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：步骤(b)中，所述渗透液按照如下进行配置：25mL20×SSC，0.1mL吐温-20，3gSDS，用水定容到100mL；然后在65℃放置至少30分钟。

和/或

步骤(b)中，将所述待测植物的器官或组织置于渗透液中进行处理是按照包括如下步骤的方法进行的：将所述待测植物的器官或组织置于所述渗透液中，65℃，2小时。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：在步骤(b)和步骤(c)之间还包括对所述待测植物的器官或组织进行再固定、蛋白酶K消化和/或预封闭的步骤；

进行所述再固定时采用的固定液的溶剂为水，溶质及浓度为：体积百分含量为4％的多聚甲醛，0.13M NaCl，3mM KCl，7mM Na₂HPO₄^.2H₂O，3mM KH₂PO₄，体积百分含量为0.1％的吐温-20；pH7.2；

进行所述蛋白酶K消化时采用的消化液为向每毫升PBST中加入20微升10mg/ml的蛋白酶K后所得的溶液；

进行所述预封闭时采用的封闭液为PBST中添加体积百分含量为5％的甘氨酸后所得的溶液。