[发明专利]一种用于组织移植的脂肪组织及其制备方法

权利要求书

1.一种用于组织移植的脂肪组织，其特征在于，包括生物支架、脂肪细胞以及细胞生长促进物质，所述脂肪细胞由种子细胞接种到所述生物支架中培养得到，所述种子细胞为间充质干细胞；

所述生物支架包括Ⅰ型胶原、硫酸软骨素、壳聚糖、氨基葡聚糖、聚乳酸、聚原酸酯、聚ε-己内酯以及聚乳酸-羟基乙酸共聚物中的至少一种；

所述细胞生长促进物质包括牛油果树果脂、积雪草苷、水解豌豆蛋白、肌酸、尿囊素以及海藻糖中的至少一种。

2.如权利要求1所述的用于组织移植的脂肪组织，其特征在于，每克所述生物支架中接种所述种子细胞的个数为10⁶～10⁷个。

3.如权利要求1所述的用于组织移植的脂肪组织，其特征在于，所述生物支架包括重量份数比为1:1～4的聚原酸酯以及聚乳酸-羟基乙酸共聚物。

4.如权利要求1所述的用于组织移植的脂肪组织，其特征在于，所述细胞生长促进物质包括重量份数比为5:2～4:1～3的积雪草苷、肌酸以及尿囊素。

5.一种制备权利要求1～4中任一项所述脂肪组织的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：提取间充质干细胞，原代培养2～3天，并对得到的细胞进行传代培养1～2周；

S2：将步骤S1得到的细胞与生物支架按比例混合，添加预先经过超声处理的诱导培养基，轻轻振荡混匀，置于微重力旋转发生器中培养1～2周；

S3：对步骤S2得到的培养物低速离心并弃去上清，添加细胞生长促进物质，即得到所述脂肪组织。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括如下步骤：

S1.1：提取间充质干细胞，用胶原酶消化30～45min，低速离心并用PBS缓冲液洗涤2次，将得到的细胞接种到10mL原代培养基中，置于5％CO₂、37℃的培养箱中进行培养；

S1.2：当细胞融合度达到80～90％时，收集贴壁细胞，消化后按1000～6000个细胞/cm²的接种量接种到10mL传代培养基中，置于5％CO₂、37℃的培养箱中进行培养，每3天换液一次，培养至细胞融合度达到80～90％时为止，离心、弃去培养液，并用PBS缓冲液洗涤2～3次。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述原代培养基为添加有体积分数5～15％的胎牛血清的DMEM-F12培养液；

所述传代培养基为添加有50～100mg/L的生长因子以及5mg/L的柑浓素的DMEM-F12培养液，所述生长因子包括重量份数比为1:1～1.5的EGE和bFGF。

8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2包括如下步骤：

S2.1：将步骤S1得到的细胞与所述生物支架按10⁶～10⁷个细胞/g生物支架的比例混合；

S2.2：配置诱导培养基，并在25℃、40～100Hz条件下超声振荡5～10min，超声结束后立即添加5～10mL所述诱导培养基至步骤S2.1得到的混合体系中，轻轻振荡混匀1～3min；所述诱导培养基为添加有10～20mg/L的吲哚美辛、20～50mg/L的维生素C以及10～20mg/L的β-甘油磷酸钠的DMEM-F12培养液；

S2.3：将步骤S2.2得到的混合体系加入微重力旋转发生器中，静置30～45min，旋转5～10min后再静置30～45min，重复3～4次，以15r/min的转速开始旋转培养1～2周，每2天排空在旋转培养过程中产生的气泡，每3～4天更换一次培养基。

9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，添加所述细胞生长促进物质的方法如下：

将所述细胞生长促进物质按2～8％的比例添加到植物源重组人血清白蛋白中混合均匀，在25℃、40～100Hz条件下超声振荡5～10min，超声结束后立即添加2～5mL至步骤S2得到的培养物中，轻轻振荡混匀1～3min。