[发明专利]双靶点嵌合抗原受体、其编码基因、具有该基因质粒、免疫T效应细胞及HIV-1应用

说明书

本发明公开了双靶点嵌合抗原受体、其编码基因、具有该基因质粒、表达载体、免疫T效应细胞及应用,所述嵌合抗原受体包含CD4抗原区(包含Leader区)、Linker区、17b单链抗体区(17bscFv)、铰链区、跨膜结构域、共刺激结构域和信号传导结构域。本发明CD4‑17bscFv‑CAR模拟了gp120的结合区域，其有效性和安全性高于早前报道的单靶点CD4‑ζCAR。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种针对HIV-1的双靶点嵌合抗原受体、其编码基因、具有该基因质粒、表达载体、免疫T效应细胞及在HIV-1方面应用。

背景技术

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus Type 1,HIV-1)，属逆转录病毒的一种，侵犯CD4+T细胞，使机体获得性免疫功能严重受损，最终导致艾滋病AIDS(Acquired immunodeficiency syndrome)。2017年8月中国疾病预防控制中心公布了全国艾滋病疫情，我国境内HIV-1(human immunodeficiency virus)的感染人数达到了718270人，其中有299169人患有艾滋病，因艾滋病死亡的人数已达到221628人。另外每年新增HIV-1感染者/AIDS病人已达140000人以上。这些数字表明我国的艾滋病感染情况十分严峻。

目前，艾滋病临床治疗方法主要是高效抗逆转录病毒疗法(Highly activeantiretroviral therapy，HAART)，HAART的使用已经导致五年内几乎100％的致死率到五年内91％的幸存率。在发达国家感染HIV的成人，从确诊后他们的平均寿命估计是40多年。在发展中国家，尽管感染HIV的成人平均寿命更短，但是他们的幸存率也提高了。不管ART的使用所取得的显著成就，我们不得不面对ART的使用所带来的一系列问题。例如，ART已经导致HIV感染发展成不易治愈的慢性疾病。另外，ART的使用也有很多劣势和局限。ART是终生疗法并且是有毒性的。在治疗过程，我们还要面对HIV药物的耐药性问题。这种疗法也不能消除病毒库中潜伏的HIV。昂贵的治疗费用也使资源有限的国家感染HIV的很多病人得不到治疗。因此，人们急需找到治疗HIV-1感染的新方法。

在由携带嵌合CD4受体的细胞针对HIV-1感染细胞的细胞溶解作用专利CN95192559.8和带CD4引诱物受体的细胞以及相关分子和方法专利CN95195183.1中都公开针对HIV-1的T细胞疗法。该疗法表明在不开展HAART治疗的情形下，经过基因改造的T细胞能够有效地控制HIV-1病毒。其作用机制主要是，由CD4胞外结构域与细胞内CD3-ζ信号结构域相连构成的CD4-ζ嵌合抗原受体(CAR)通过病毒载体转染到人T细胞，由于CD4是HIV-1感染细胞的主要受体，CD4-ζCAR的CD4胞外结构域通过结合位于感染细胞表面的HIV-1外膜蛋白gp120来模拟免疫突触，导致CD4-ζCAR-T细胞活化，进而裂解HIV-1感染细胞，降低患者体内的HIV-1病毒载量。但是，CD4-ζCAR-T细胞在结合gp120抗原后，虽然可以激活T细胞杀死结合的HIV-1感染细胞，但是激活的T细胞很难进一步增殖，只能发挥瞬时效应，且CD4-ζCAR-T细胞易受HIV-1感染，成为新的宿主。该方法在后期临床试验效果并不理想，迄今为止，还没有得到广泛的应用。

因此，开发一种新的用于HIV-1治疗的安全、高效型嵌合抗原受体，不但具有迫切的研究价值，也具有良好的经济效益和大规模医疗应用潜力，这正是本发明得以完成的动力所在和基础。

发明内容

为了克服上述所指出的现有技术的缺陷，本发明人对此进行了深入研究，在付出了大量创造性劳动后，从而完成了本发明。

具体而言，本发明所要解决的技术问题是：提供双靶点嵌合抗原受体、其编码基因、具有该基因质粒、表达载体、免疫T效应细胞及在HIV-1方面的应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：