[发明专利]一种血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株及其应用

说明书

本发明公开了一种血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株及其应用，所述血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株于2017年11月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2017706；本发明的血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株致病力极低，适合用于制备治疗副猪嗜血杆菌病的药物；所述药物为疫苗；所述疫苗的制备方法包括如下步骤：S1.菌体培养；S2.菌体收集；S3.冻干。制备药物时无需灭活及灭活检验，制备方法简单，药物生产效率更高；所述疫苗对28‑35日龄仔猪，免疫剂量为2.0×10⁸CFU/mL时，免疫保护率即可达到100％。

技术领域

本发明属于副猪嗜血杆菌应用领域，更具体地，涉及一种血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株及其应用。

背景技术

副猪嗜血杆菌病是近年来严重危害养猪业的新发细菌性传染病，引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜脑炎等，发病率一般为10-15％，死亡率可达50％以上，给养猪业带来了巨大的经济损失，引起了人们的日益重视。该病的致病菌副猪嗜血杆菌(Hps)的血清型复杂多样，按Kieleetin.Rap-Gbarideosn(KRG)琼脂扩散血清分型方法，至少可将Hps分为15个血清型，另有20％以上的分离株血清型不可定。已有的资料表明，Hps具有明显的地方性特征。

因副猪嗜血杆菌极易产生耐药性，所以控制该病的有效方式是疫苗接种。文献报道商业疫苗或自家苗的使用可以控制副猪嗜血杆菌的感染。但是也有使用灭活菌苗预防失败的实例，这可能是由于致病菌株与疫苗菌株血清型不同因而缺乏交叉保护。虽然交叉保护是对商品灭活疫苗的基本要求，但是菌株特异性灭活菌苗可能因为猪群中存在不止一种菌株或血清型而缺乏效力，也可能因为后来猪群中引入了新的菌株而失去效力。由于副猪嗜血杆菌血清型的多样性以及占很大比例的不能分型菌株，菌株毒力的差异，以及当前对保护性抗原和毒力因子缺乏深刻认识，还不可能有一种灭活菌苗同时对所有的致病菌株产生交叉保护力。研制具有交义保护的疫苗是预防和控制副猪嗜血杆菌病的必然要求和大势所趋。

疫苗产品的开发除高效的技术要求外，免疫成本必须低廉，不能超出养殖业的承受能力。减(弱)毒活疫苗因具有免疫效价高(可减少抗原剂量)、成本低廉、可开发广谱疫苗(活菌疫苗具有交叉保护性)的新技术优势，是当前多数传染病的研究热点。

发明内容

针对上述现有技术中的不足，本发明提供了一种血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株，该弱毒菌株的致病力大大减弱，适合用于制备治疗副猪嗜血杆菌病的药物。

本发明的第二个目的在于提供一种上述血清7型副猪嗜血杆菌弱毒菌株的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。

一种血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株，所述血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株于2017年11月22日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2017706；分类命名：副猪嗜血杆菌HPS1712，拉丁文学名：Haemophilus parasuis HPS1712，地址：中国武汉武汉大学。

所述血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株的应用为利用血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒菌株制备治疗副猪嗜血杆菌病的疫苗；

所述疫苗的制备方法，包括如下步骤：

S1.菌体培养：

将副猪嗜血杆菌HPS1712菌株的菌粉接种于TSA/V/S固体培养基分区划线，37℃培养24h；挑取单菌落重新接种TSA/V/S固体培养基传3～5代，37℃培养12～16h然后挑取平板上单菌落接种于TSB/V/S液体培养基活化12h，进行纯粹检验合格后，转接到大瓶TSB/V/S液体培养基，37℃，170rpm摇床振荡扩大培养12h；所述TSA/V/S及TSB/V/S培养基为含5％牛血清，0.2％NAD的培养基；

S2.菌体收集：