[发明专利]一种中性内切果胶酸裂解酶的制备方法

权利要求书

1.一种中性内切果胶酸裂解酶的制备方法，其特征在于，将培养成熟的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)WENA703由茄瓶斜面接种到种子罐，再到发酵罐进行二级发酵，生产出发酵醪液；

上述发酵醪液经过管式离心、板框过滤、超滤浓缩、纸板硅藻土除菌、标准化制备成中性果胶酸裂解酶活力≥300000u/ml，经防腐处理得到酶活力保持率为95％以上的标准高活力中性果胶酸裂解酶酶液；

其中，蜡样芽孢杆菌WENA703，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：M2017368。

2.根据权利要求1所述的中性内切果胶酸裂解酶的制备方法，其特征在于，培养基配方为：山梨糖醇8％、麦麸3％、乳清粉1％、玉米浆1.6％、氯化钠0.5％、玉米胚芽粉1.5％、水84.4％，其中所述各组分之和为100％。

3.根据权利要求1所述的中性内切果胶酸裂解酶的制备方法，其特征在于，种子罐培养条件：种子罐培养温度35℃±1℃，搅拌转速0时120r/min、8时160r/min，罐压0.1MPa，通气量0时1：0.20、8时1：0.33，培养周期12小时，种子成熟标准为菌体90％以上呈单体，染色均匀，中性果胶酸酶酶活力不高于200u/ml，pH值6.7左右。

4.根据权利要求1所述的中性内切果胶酸裂解酶的制备方法，其特征在于，发酵罐培养条件：发酵罐培养温度0时33℃±1℃、6时34℃±1℃，搅拌转速0时120r/min、8时180r/min，32时140r/min，罐压0.1MPa，通气量0时1：0.16、8时1：0.28、32时1：0.2，发酵周期38小时±4小时；放罐条件是：pH值上升至7.0以上，酶活力不再增加、菌体90％以上形成芽孢并有部分发生自溶现象。