[发明专利]一种制备单倍体核细胞的方法

权利要求书

1.一种单倍体核细胞的制备方法，包括如下步骤：

(1)提供次级卵母细胞，用显微操作针将第一极体取出；所述次级卵母细胞来自小鼠、猴、兔子或牛；所述显微操作针内径为10微米-30微米；

(2)将取出的所述第一极体放置于所述次级卵母细胞的卵周间隙中相对于原第一极体位置的三点钟至九点钟位置；

(3)将所述第一极体与次级卵母细胞进行融合；

(4)激活完全融合的上述细胞，之后其分裂为两个第二极体以及两个单倍体核细胞；

(5)在激活后3-6小时内，用显微操作针分别将所述两个第二极体与邻近的两个单倍体核细胞分离开来，得到四个单倍体细胞；所述单倍体核细胞包含细胞核及一小部分细胞质；

(6)将步骤(5)中得到的四个单倍体细胞在培养液中培养1-4小时，使所述第二极体与邻近的单倍体核细胞完全分离开。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述显微操作针内径为20微米。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(2)中，所述第一极体的放置位置为卵周间隙中相对于原第一极体位置的对侧。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(3)中，所述融合方法为电融合、化学融合或病毒融合。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(4)中，所述激活的方式为胞浆内单精子注射激活、机械激活、电激活或化学激活。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(5)中，所述单倍体核细胞基本上不包含细胞质。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(6)中，所述培养时间是2小时。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(6)中，所述培养液为卵裂培养液、囊胚培养液、普通细胞培养液或体外操作液，其中体外操作液选自Vitrolife的G1、G2或G-MOPs。