[发明专利]一种能特异性敲减RBM47基因的慢病毒的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种特异性敲减人RBM47基因的慢病毒的构建方法，其包括如下步骤：

Step1,通过PCR合成能特异性敲减人RBM47基因的shRNA序列；

Step2,构建能特异性干扰RBM47基因的重组质粒；

Step3,包装能特异性干扰RBM47基因的慢病毒；

Step4,筛选验证Step3中的能够特异性干扰RBM47基因的慢病毒；

Step5,观察Step3中能够特异性干扰RBM47基因的慢病毒对肺癌细胞生物学功能的影响；

其特征在于：在所述的步骤Step1中，针对人RBM47基因的编码区，设计2个能特异性敲减人RBM47基因的靶序列，分别为：

RNAi-1-F：

CcggccGCCCAATAACTCCAGTATACTCGAGTATACTGGAGTTATTGGGCGGTTTTTg；

RNAi-1-R：

aattcaaaaaccGCCCAATAACTCCAGTATACTCGAGTATACTGGAGTTATTGGGCGG；

RNAi-2-F：

CcgggaTGAAGAAGCGCGAGGAAATCTCGAGATTTCCTCGCGCTTCTTCATCTTTTTg；

RNAi-2-R：

aattcaaaaagaTGAAGAAGCGCGAGGAAATCTCGAGATTTCCTCGCGCTTCTTCATC。

2.如权利要求1所述的特异性敲减人RBM47基因的慢病毒的构建方法，其特征在于：所述的步骤Step1中，选用限制性内切酶AgeI和EcoRI，分别于靶序列的5’端和3’端加上AgeI、EcoR I限制性内切酶位点。

3.如权利要求1所述的特异性敲减人RBM47基因的慢病毒的构建方法，其特征在于：用于特异性敲减人RBM47基因的慢病毒的载体包括GV248、pSH-H1-GFP、pSH-U6-GFP、PLent-U6-Puro、PLent-U6-Puro。

4.如权利要求1所述的特异性敲减人RBM47基因的慢病毒的构建方法，其特征在于：所述的shRNA序列是一个正义链具有RNAi-1-F的核苷酸序列，反义链具有RNAi-1-R的核苷酸序列的双链核苷酸序列。

5.如权利要求1所述的特异性敲减人RBM47基因的慢病毒的构建方法，其特征在于：所述的shRNA序列是一个正义链具有RNAi-2-F的核苷酸序列，反义链具有RNAi-2-R的核苷酸序列的双链核苷酸序列。

6.如权利要求4或5所述的特异性敲减人RBM47基因的慢病毒的构建方法，其特征在于：所述的能特异性敲减人RBM47基因的shRNA序列，可以用于构建含shRNA序列编码基因的表达载体、慢病毒、转基因细胞系和宿主菌。

7.根据权利要求6的方法构建的能够特异性敲减人RBM47基因的shRNA序列、重组质粒、表达载体、慢病毒、转基因细胞系和/或宿主菌。

8.如权利要求6所述的能够特异性敲减人RBM47基因的shRNA序列、重组质粒、表达载体、慢病毒、转基因细胞系和/或宿主菌在抑制癌细胞增殖、克隆形成、和细胞周期进展方面的应用。

9.如权利要求6所述的能够特异性敲减人RBM47基因的shRNA序列、重组质粒、表达载体、慢病毒、转基因细胞系和/或宿主菌在制备治疗肿瘤药物方面的应用。