[发明专利]五羟色胺-磁性微粒复合物及富集唾液酸化糖蛋白的方法

权利要求书

1.一种五羟色胺-磁性微粒复合物，其特征在于：该复合物为表面固定有五羟色胺的磁性微粒；

所述复合物包括结合于Fe₃O₄磁性微粒表面的硅原子以及与所述硅原子连接的功能化基团，所述功能化基团的结构如式1所示：

式1中，n的取值为3～5，R为五羟色胺的氨基脱去一个氢原子剩余的部分。

2.根据权利要求1所述一种五羟色胺-磁性微粒复合物，其特征在于：所述n的取值为3。

3.根据权利要求1所述一种五羟色胺-磁性微粒复合物，其特征在于：所述Fe₃O₄磁性微粒采用化学共沉淀法制成。

4.一种如权利要求1所述的五羟色胺-磁性微粒复合物的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：

利用环氧化修饰的磁性微粒作为固定五羟色胺的载体，在碱性条件下，将五羟色胺通过氨基与环氧基的开环反应共价偶联于所述载体表面；

所述制备方法具体包括以下步骤：

1)向分散均匀的0.4～1.2g Fe₃O₄磁性微粒中加入3～7mL环氧化试剂和0.2～0.6mL冰乙酸，然后于20～30℃水浴中反应2～4h，反应结束后用无水乙醇清洗，然后于60～80℃下烘干，得到环氧化修饰的磁性微粒；

2)将1mg环氧化修饰的磁性微粒与1mL 10～50μM五羟色胺盐酸盐溶液混合后避光反应2～8h，所述五羟色胺盐酸盐溶液采用的溶剂为偶联缓冲溶液，偶联缓冲溶液为0.1～0.3MNaHCO₃与0.2～0.8M NaCl的混合溶液，反应结束后利用偶联缓冲溶液清洗所述磁性微粒，然后于50～80℃下烘干。

5.一种富集唾液酸化糖蛋白的方法，其特征在于：包括以下步骤：

将采集的样品与结合缓冲溶液以及五羟色胺-磁性微粒复合物混合后于20～25℃下避光震荡2～4h，然后依次进行清洗和震荡洗脱，收集洗脱液；所述五羟色胺-磁性微粒复合物为表面固定有五羟色胺的磁性微粒；所述复合物包括结合于Fe₃O₄磁性微粒表面的硅原子以及与所述硅原子连接的功能化基团，所述功能化基团的结构如式1所示：

式1中，n的取值为3～5，R为五羟色胺的氨基脱去一个氢原子剩余的部分。

6.根据权利要求5所述一种富集唾液酸化糖蛋白的方法，其特征在于：所述震荡洗脱的条件包括：洗脱温度为20～25℃，洗脱时间为20～60min。

7.根据权利要求5所述一种富集唾液酸化糖蛋白的方法，其特征在于：所述样品选自动物或人的乳汁及其分离物、血液及其分离物或植物的匀浆物，五羟色胺-磁性微粒复合物的用量为1～5mg，样品与结合缓冲溶液总体积为0.5～1.5mL，样品与结合缓冲溶液体积比为1:0.25～8。

8.根据权利要求5所述一种富集唾液酸化糖蛋白的方法，其特征在于：所述清洗采用结合缓冲溶液，结合缓冲溶液为10～30mM磷酸钠溶液，震荡洗脱采用的洗脱剂选自0.05～0.15M NaHCO₃与0.2～0.8M NaCl的混合溶液，或10～30mM Na₃PO₄与0.2～0.8M NaCl的混合溶液。