[发明专利]一种水稻纹枯菌粗毒素鉴定方法

说明书

本发明属于植物病害预防技术领域，具体涉及一种水稻纹枯病菌粗毒素鉴定方法的专利申请。该方法包括菌株培养，提取水稻纹枯病菌粗毒素等步骤。本发明的创新点主要体现在用乙醚对水稻纹枯病菌粗毒素进行提取后，首次在气相色谱分析时采用乙醚做溶剂对粗毒素进行了物质组分分析。结果表明，用该方法提取的水稻纹枯病菌粗毒素可引起水稻病斑产生，表明其具有生物活性。其组成成分鉴定结果也为首次报道。这为今后研究水稻纹枯病菌粗毒素提供了较为可靠简便的方法。同时，粗毒素组成成分的鉴定也为进一步研究其致病机理打下了坚实的基础，为今后植物抗病育种的研究提供了理论指导。

技术领域

本发明属于植物病害预防技术领域，具体涉及一种水稻纹枯病菌粗毒素鉴定方法。

背景技术

立枯丝核菌是水稻纹枯病的主要真菌病原体，在世界上所有稻米产区都可造成重大产量损失。无性态为立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kühn属半知菌，产生菌丝和菌核。病菌的菌丝比较粗壮，开始培养时无色，成熟时呈淡褐色，生长温度为10-30℃，适温29℃。立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)是一种不产生任何无性孢子，并经常以菌丝或菌核的形态存在于自然界的生活在土壤里的病原菌，且其中大部分病原菌是重要的植物病原菌。

近年来，随着学者们对纹枯病的研究更加深入，发现从病菌中提取的毒素是引起纹枯病菌的主要致病因子，毒素会导致植物产生纹枯病的症状。从立枯丝核菌提取的毒素被认为是对植物组织有损害作用的化合物。Aoki等从甜菜中分离到2个立枯丝核菌菌株，然后用马铃薯蔗糖液体培养基或改良的Richard培养液对分离到的菌株进行离体培养，从它们的代谢物共分离和鉴定出了苯乙酸(Phenylacetic acid)、间羟基苯乙酸(m-hydroxyphenylacetic acid)、β -呋喃甲酸(β-furoic acid)、丁二酸(succinic acid)、乳酸(lactic acid)5种成分。其中间羟基苯乙酸(m-hydroxyphenylacetic acid)在0.025％以上的浓度下能抑制甜菜根的生长，0.1％以上的浓度能产生坏死斑。合成的邻羟基苯乙酸(o-hydroxyphenylacetic acid)经测定可以产生与间羟基苯乙酸(m-hydroxyphenylacetic acid)相同的作用。他们同时从侵染的甜菜根部组织中分离这几种酸，分别为苯乙酸(Phenylacetic acid)、Vanillic acid(香草酸)、呋喃甲酸(furoicacid)，但未分离出间羟基苯乙酸(m-hydroxyphenylacetic acid)。因此，他们认为，立枯丝核菌先产生苯乙酸(Phenylacetic acid)，接着通过代谢作用形成羟基衍生物，而这些化合物对立枯丝核菌致病过程中有共同作用。此外，Mandava等从大豆上分离出了AG-IV融合群的立枯丝核菌菌株，并用这个菌株进行液体培养，分离出一种化合物，鉴定为间羟基间甲氧基苯乙酸 (m-hydroxy-and m-met hoxyphenylacetic Acid)。这种毒素和其他苯乙酸衍生物与生长调控有关，他们通过实验证明这种间羟基苯乙酸(m-hydroxyphenylacetic acid)具有寄主专化性，只在侵染大豆的AG-IV融合群的菌株中有活性。此外，他们还首创了高效液相色谱法来检测苯乙酸及其衍生物数量的一种方法。Vidhyasekaran等从水稻纹枯病菌中分离出了一种寄主专化性毒素，纯化并分析为含有葡萄糖、甘露糖、N-乙酰半乳糖胺和N-乙酰基葡萄糖的碳水化合物。

目前对于水稻纹枯病菌粗毒素的成分鉴定研究还处于初始阶段，各种组分结构并不统一。本发明即针对此疑难问题，首次使用乙醚溶解样品对水稻纹枯病菌粗毒素的成分进行了气相色谱分析，从而为进一步深入研究和鉴定水稻纹枯病菌粗毒素提供了有益的探索和翔实的数据，为今后水稻纹枯病抗病遗传育种打下了坚实的基础。

发明内容

本发明提供了一种水稻纹枯病菌粗毒素鉴定方法。

技术问题本发明的目的是针对目前对于水稻纹枯病菌粗毒素的研究处于初始阶段，各种组分结构并不统一的现状，提供一种水稻纹枯病菌粗毒素鉴定方法。