[发明专利]复合型人工小血管支架及其制备方法

权利要求书

1.一种复合型人工小血管支架，其特征在于：所述小血管支架包括内层和外层，所述内层为去细胞心内膜，所述外层为主动脉弹力层微米颗粒多孔支架，所述外层和内层间采用胶原连接：

其制备方法，包括如下步骤：

（1）内层材料的制备：取新鲜猪心脏，用生理盐水冲洗干净，以心内膜为原料采用去细胞液进行去细胞处理；将去细胞的心内膜浸入含有2-3 %戊二醛液体作用3-4h，用双蒸水反复冲洗去残余戊二醛，环氧乙烷消毒备用得到内层去细胞心内膜；

（2）外层材料的制备：取猪的主动脉弹力层组织，并在匀浆器中打碎至小颗粒，在液氮中进行反复研磨后取直径5-30μm的颗粒；用离心机离心加入质量百分比为1%的tritonx-100 处理 12-24小时后，加入去细胞液48-72 h，用双蒸水反复悬浮、离心去除去细胞液；

（3）取预先制备的直径为3mm 的不锈钢轴，将去细胞心内膜缝制于轴上，长度为3-4cm；

（4）取预先制备的管状模具，将颗粒制成30-50%体积比的溶液，将溶液置于管状模具中，依次在-20℃、-80℃下冷冻1~1.5小时，真空干燥36-48小时，去除模具形成多孔支架，用蛋白质交联剂交联；

（5）内层和外层的复合：将内层材料连同轴心套入多孔支架中，向内层和外层间的空隙中注入液态胶原粘合，依次在-20℃、-80℃下冷冻1-1.5小时后真空干燥36-48小时；

（6）细胞种植：将Brdu 标好的骨髓干细胞诱导后的平滑肌样细胞种植于外层的表面，在体外生物反应器中培养2-3 周，拔出轴心，将转染绿色荧光蛋白的慢病毒载的CD34+诱导后的内皮样细胞种植于内表面，体外继续培养1-2 周。

2.如权利要求1所述的复合型人工小血管支架，其特征在于：所述小血管支架的外径为4~4.5mm。

3.如权利要求1所述的复合型人工小血管支架，其特征在于：所述小血管支架的内径为3~3.2mm。

4.如权利要求1述的复合型人工小血管支架，其特征在于：所述蛋白质交联剂为质量分数为0.45-0.55%的京尼平。

5.如权利要求1所述的复合型人工小血管支架，其特征在于：所述步骤（1）中的去细胞液为0.5% tritonx-100+0.5% SDS+ 150 IU/mL DNase I+100 μg/mL RNase A。

6.如权利要求1所述的复合型人工小血管支架，其特征在于：所述液态胶原的浓度为30-60mg/ml。

7.如权利要求1所述的复合型人工小血管支架，其特征在于：所述多孔支架的孔径为25~100μm，孔隙度为70%。