[发明专利]一种稳定的对硝基苯磷酸溶液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种稳定的对硝基苯磷酸溶液，溶液含有Trisbase‑HCl缓冲液，咪唑，对硝基苯磷酸二钠，叠氮化钠。其配制方法是：1)将Trisbase和咪唑依次溶于去离子水中；2)用盐酸溶液调节以上溶液pH至8.4后加入叠氮化钠，搅拌使充分溶解；3)加入对硝基苯磷酸二钠，充分混匀后定容；4)将配制好的存储液转入棕色试剂瓶，于2‑8℃条件下避光保存。本发明配制的对硝基苯磷酸溶液具有较好稳定性，该存储液用于碱性磷酸酶测定试剂盒中精密度、相关性良好，同时产品具有较好稳定性。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及一种稳定的对硝基苯磷酸溶液及其制备方法。

背景技术

碱性磷酸酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高。

目前碱性磷酸酶的检测主要是基于PNPP-AMP法，即在碱性条件下，碱性磷酸酶水解底物对硝基苯磷酸二钠(PNPP)，水解产物对硝基苯酚形成速率和碱性磷酸酶的活性成正比。然而，PNPP是一种不稳定的化合物，在光照或溶液状态下极易分解，给设计具有适用价值的试剂盒带来困难。专利US3425912A提供了一种使用有机胺与对硝基苯磷酸反应制备稳定的干态PNPP盐的方法。专利US4132598提到使用酚类或者含咪唑结构的化合物可以作为PNPP在溶液中的稳定剂，为得到稳定的对硝基苯磷酸溶液，要先将底物对硝基苯磷酸和稳定剂在干态的条件下混合后再溶于去离子水中，然后调节溶液pH至8.6左右，操作步骤比较复杂。

发明内容

本发明的目的在于公开一种稳定的对硝基苯磷酸溶液及其制备方法。

本发明所采取的技术方案是：一种稳定的对硝基苯磷酸溶液，溶液含有Trisbase-HCl缓冲液，咪唑，对硝基苯磷酸二钠，叠氮化钠。

优选的，溶液中Trisbase-HCl缓冲液浓度为30-50mM；按质量体积比计，咪唑浓度为0.4-0.6％，对硝基苯磷酸二钠浓度为1.5-5.0％，叠氮化钠浓度为0.1-0.2％。

优选的，Trisbase-HCl缓冲液pH为8.4。

一种碱性磷酸酶试剂盒，试剂盒由反应缓冲液和底物存储液两部分组成。

优选的，反应缓冲液由AMP-HCl缓冲液，硫酸镁，硫酸锌，HEDTA组成。

硝基苯磷酸溶液的配制方法，包含以下步骤：

1)将Trisbase和咪唑依次溶于去离子水中；

2)用盐酸溶液调节以上溶液pH至8.4后加入叠氮化钠，搅拌使充分溶解；

3)加入对硝基苯磷酸二钠，充分混匀后定容；

4)将配制好的存储液转入棕色试剂瓶，于2-8℃条件下避光保存。

本发明的有益效果是：本发明无需将底物与其保护剂在干态下预混合，只需依序将各物料溶于去离子水即可，减少了实验设备的使用，简化了生产工艺。碱性磷酸酶底物存储液具有较好稳定性，该存储液用于碱性磷酸酶测定试剂盒中精密度、相关性良好。且工艺简单、减少了试验设备，同时产品具有较好稳定性。

具体实施方式

实施例

1、配制工艺