[发明专利]一种简单快速的水稻DNA提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种基于PCR的简单快速提取水稻DNA的方法。

背景技术

水稻是世界上最主要的三大粮食作物之一，有着丰富和深入的基因组研究基础，其中DNA的制备是深入进行分子生物学研究的基础。基于PCR分子标记技术已经广泛应用于基因定位、基因克隆、转基因植株检测及分子标记辅助育种等方面，这些研究都需要进行大量DNA提取工作。然而，DNA提取是一项耗费人力、物力的繁琐工作。因此，建立适合PCR分析的简便、高效、低成本的DNA提取方法是非常必要的。

前人已就植物基因组DNA的提取总结了一系列的方法，如SDS法和CTAB法，虽然这些方法抽提的DNA质量较好，但过程费力且繁琐，需要使用氯仿、异戊醇等有毒化学试剂，难以适用于大量植物叶片基因组DNA提取的需要。相应地，一些生物公司也开了一些基因组DNA提取试剂盒，但试剂盒往往成本较高，也不适用于大量样品DNA的提取。

发明内容

为了解决上述问题，实现高通量提取水稻DNA，满足各种PCR分子标记技术的要求，本发明提供了一种简单、快速的提取植物DNA的方法。

本发明提供了一种简单快速的水稻DNA提取方法，按如下步骤进行：

步骤1）取5-10mg水稻叶片，将其尽量剪碎，长度小于1cm，置于2ml离心管中；

步骤2）向离心管中加入200-500µl提取液，在烘箱中65℃处理30min，在此期间每隔10-20min轻摇一次；

步骤3）再将上述离心管在10000rpm条件下，离心5min，并将上清液转入装有异丙醇的96孔板中，转移至-20℃冰箱或室温静置30min-1h；

步骤4）在6000rpm离心3min，弃上清液；用排枪加入70％的无水乙醇200µl清洗，吹干；

步骤5）加入灭菌的双蒸水或TE溶液溶解，即可提取DNA；

所述提取液为：12.114g三羟甲基氨基甲烷，3.722g乙二胺四乙酸二钠，74.55g氯化钾，加水定容至1L，pH=8.0。

与现有技术相比较，本发明提供的水稻DNA提取方法具有如下优点：

（1）简单：本发明提供的DNA提取方法操作简单，不需要用液氮磨样，不需要使用氯仿、异戊醇等有毒化学试剂，也不需要反复抽提。

（2）经济：本发明所用的试剂少，成本低。

（3）保存长久：本发明提取的DNA保存时间长，不容易降解。

（4）质量高：本发明提供的DNA提取方法无论是扩增基因（1000bp）还是SSR分子标记，PCR扩增效率高，条带清晰。

（5）适用广：本发明提供的水稻DNA提取方法，除了适用于水稻叶片，水稻的根和种子也适用，同时也可用于其他作物。

附图说明

图1是利用引物Pi-hk1-P15扩增水稻叶片DNA经PCR扩增后实施的效果图。

图2是利用引物RM24097扩增水稻叶片DNA经PCR扩增后实施的效果图。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，所描述的实施案例并非本发明的实施例全部，而仅仅是一部分。实施例1-2所用到的引物序列见表1。

实施例1：利用引物Pi-hk1-P15扩增水稻叶片DNA

2017年5月17日在秧田育苗，6月15日进行移栽至大田，1月后进行取样，将叶片剪碎放入2ml离心管中，加入500µl提取液， 65℃处理30min，10000rpm离心5min，将上清液移至盛有100µl异丙醇的96孔板中，静置30min，离心后去上清，用排枪加入70％的无水乙醇200 µl清洗，吹干，加100-200µl灭菌后的ddH₂O或TE溶液溶解。本实施例中提取液为：12.114g三羟甲基氨基甲烷（Tris），3.722g乙二胺四乙酸二钠（EDTA），74.55g氯化钾（KCl），加水定容至1L，pH=8.0。