[发明专利]一种甘薯黑痣病菌快速增殖培养基

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种促进甘薯黑痣病菌增殖的培养基。

背景技术

甘薯黑痣病（Sweet potato mole disease）是由半知菌亚门甘薯毛链孢(Monilochaetesinfuscans Ell. et Halst. ex Harter)引起的，在我国各甘薯产区均有发生。该病只侵害地表下薯蔓和薯块，并不深入薯肉，对薯块产量基本无影响，但薯块发病后易丧失水分，在贮藏期容易干缩，影响质量和食用价值。尤其是对鲜食甘薯的商品性影响极大，严重影响甘薯鲜食产业的发展。目前，甘薯品种黑痣病抗性鉴定工作已经引起甘薯育种单位及种薯种苗企业的重视。田间抗性鉴定工作需要大量的黑痣病菌，目前黑痣病菌大量增殖采用的液体培养基为PDB，但是病菌在该培养基上增殖速度极为缓慢，不利于田间抗性鉴定工作的开展。

发明内容

本发明的目的是提供一种促进甘薯黑痣病菌增殖的培养基，有效解决甘薯黑痣病菌增殖速度慢、培养周期长，制约抗病鉴定工作开展的问题。

为解决以上问题，该发明提供一种甘薯黑痣病菌快速增殖培养基—马铃薯酵母培养基（Potato Dextrose Yeast Medium，PDY）。

本发明是通过如下技术方案实现的，一种甘薯黑痣病菌快速增殖培养基，通过将一定量的酵母粉加入到马铃薯液体培养基中，分装后，121℃高温高压灭菌制备而成；

所述甘薯黑痣病菌快速增殖培养基，其各原料及其用量为：去皮马铃薯200 g，葡萄糖或蔗糖20 g，酵母粉2 g，纯净水1 L；具体制备方法如下：

步骤1）将马铃薯洗净去皮，称取200 g切成小块放入锅中，加纯净水1L，加热至沸腾，继续煮沸20-30min；

步骤2）用2层纱布趁热过滤，弃滤渣，滤液补充纯净水至1L；

步骤3）称取酵母粉2 g、葡萄糖或蔗糖20 g，倒入热的滤液中，利用玻璃棒充分搅拌混匀；

步骤4）按需求，将配制好的培养基分装入三角瓶或试管内，分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，在瓶口棉塞外包两层报纸，用橡皮筋包扎好，于121℃高温高压灭菌20 min制成。

该本发明的优点是：本发明的培养基PDY能够提高甘薯黑痣病菌的增殖速率，降低扩繁黑痣病菌所需的时间和工作量。该培养基制备操作过程简便，易学，配制所需的原料易获得且价格低廉，具有很好的经济性，适合大规模生产和使用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

（1）病原菌分离和准备：

从田间采集甘薯黑痣病发生典型症状薯块，按组织分离法分离获得黑痣病菌，并按照柯赫氏法则回接薯块鉴定，且病菌通过形态学及分子生物学鉴定；将分离且鉴定正确的黑痣病菌于28℃在PDA平板培养基上活化2周；将培养好的黑痣病菌平板用无菌水冲洗，获得孢子悬浮液，并将孢子悬浮液浓度稀释到1.0×10⁶个/ml左右。

（2）培养基的制备：

PDB培养基：1、将马铃薯洗净去皮，称取200 g切成小块放入锅中，加水1L，加热至沸腾，维持20-30min；2、用2层纱布趁热过滤，弃滤渣，滤液补充纯净水至1L；3、称取葡萄糖或蔗糖20 g，倒入热的滤液中，利用玻璃棒充分搅拌混匀；4、将配制好的培养基分装入玻璃三角瓶内，每瓶50 ml，分装完毕后，在三角烧瓶口上塞上棉塞，在棉塞外包两层报纸，用橡皮筋包扎好，于121℃高温高压灭菌20 min。

PDY培养基：1、将马铃薯洗净去皮，称取200 g切成小块放入锅中，加纯净水1L，加热至沸腾，继续煮沸20-30min；2、用2层纱布趁热过滤，弃滤渣，滤液补充纯净水至1L；3、称取酵母粉2 g、葡萄糖或蔗糖20 g，倒入热的滤液中，利用玻璃棒充分搅拌混匀；4、将配制好的培养基分装入玻璃三角瓶内，每瓶50 ml，分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞、试管帽等)，在棉塞外包两层报纸，用橡皮筋包扎好，于121℃高温高压灭菌20 min。

（3）试验方法：

在紫外消毒的超净工作台中，将50 µL浓度为1.0×10⁶个/ml甘薯黑痣病菌孢子悬浮液接种于50 ml上述两种培养基，28℃ 150 rpm恒温震荡培养10 d， 用已烘干称重的滤纸过滤，将菌体同滤纸一起放入干燥箱 80℃烘干处理 24 h，室内回潮2 h后称重并计算菌体干重。每处理 6次重复。

（4）试验结果：