[发明专利]一种基于荧光共振能量转移的二氧化硅荧光免疫标记探针、制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于荧光共振能量转移的二氧化硅荧光免疫标记探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

1)、将十六烷基三甲基溴化铵CTAB溶于去离子水；

2)、加入乙二醇和氨水；

3)、之后加入正硅酸乙酯TEOS反应；

4)、然后，再加入混合好的BODIPY溶液和罗丹明B溶液，再加入三甲氧基甲基硅烷MTMS，反应；

5)、再加入3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES继续反应；离心洗涤，冷冻干燥，得RB-BODIPY-FRET二氧化硅纳米粒子，即为基于荧光共振能量转移的二氧化硅荧光免疫标记探针。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，从步骤1)开始，全程均在60-70℃条件下反应。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中加入乙二醇和氨水后3-6min内加入正硅酸乙酯TEOS；反应时间为30-60min。

4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤4)所述反应时间为2-4h。

5.根据权利要求1-4所述的制备方法，其特征在于，步骤5)所述反应时间为1-2h。

6.根据权利要求1-4所述的制备方法，其特征在于，步骤4)混合前BODIPY溶液浓度为0.001mmol/mL-0.006mmol/mL；混合前罗丹明B溶液浓度为0.001mmol/mL-0.006mmol/mL；混合后BODIPY和罗丹明B摩尔比为1:1。

7.根据权利要求1-6所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：

1)、在60-70℃下将十六烷基三甲基溴化铵CTAB 0.03-0.08g在磁力搅拌条件下溶于30-70mL去离子水中；

2)、随后在60-70℃下加入0.4-0.7mL乙二醇和2-3mL氨水；

3)、加入乙二醇和氨水后的3-6min内加入正硅酸乙酯TEOS 100-200μL反应30-60min；

4)、加入1ml BODIPY溶液和罗丹明B的混合溶液及0.02-0.05mL三甲氧基甲基硅烷MTMS，反应2-4h；

5)、再加入0.06-0.1mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES继续反应1-2h；

完成反应后搅拌冷却至室温，离心洗涤2-4次，冷冻干燥得RB-BODIPY-FRET二氧化硅纳米粒子，避光密封保存。

8.一种采用权利要求1-7任一项所述方法制备得到基于荧光共振能量转移的二氧化硅荧光免疫标记探针。

9.一种权利要求8所述的基于荧光共振能量转移的二氧化硅荧光免疫标记探针偶联抗体的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，具体应用方法为：

a、将抗体溶解到醋酸缓冲液中，再加入过碘酸钠溶液，于4℃避光搅拌进行氧化，超滤除去未反应的过碘酸钠，得到氧化抗体；

b、将上述制备的基于荧光共振能量转移的二氧化硅荧光免疫标记探针清洗后分散到PBS缓冲溶液中；在搅拌下加入步骤a制备的氧化抗体，于4℃下避光搅拌；

c、最后，加入硼氢化钠溶液继续4℃避光搅拌，将反应后的溶液离心洗涤，分散到PBS缓冲溶液中，4℃储存备用。