[发明专利]一种从微藻中提取防污活性物质的方法

权利要求书

1.一种从微藻中提取防污活性物质的方法，包括冻融破壁、重悬浮、分级盐析、双水相萃取、超滤纯化和产品配制，其特征在于：所述的产品配制为在超滤纯化后得到的10份防污活性物质中加入5~10份甘油、0.001~0.002份EDTA、0.0005~0.001份DTT和0.3~0.5份间苯二酚而缩水甘油醚，混合均匀得到成品。

2.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取防污活性物质的方法，其特征在于：所述的冻融破壁为：在微藻泥中加入超纯水，微藻泥和超纯水的质量体积比为1g：0.6~2.0ml，于-25~-15℃温度下冷冻，于15~25℃温度下解冻，反复冻融次数1~3次，冻融结束后2~6℃温度下8000~12000r/min离心6~15min，保存上清液和沉淀。

3.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取防污活性物质的方法，其特征在于：所述的重悬浮为：在冻融破壁后得到的沉淀中加入3~6倍体积的Tris-HCl缓冲液，重复离心2~4次，合并上清液；所述Tris-HCl缓冲液pH为7.5~8.0。

4.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取防污活性物质的方法，其特征在于：所述的分级盐析为：将冻融破壁后得到的上清液和重悬浮后得到的上清液合并，加入硫酸铵，使溶液中硫酸铵饱和度达到15~25%，搅拌，2~6℃温度下4000~6000r/min离心3~8min，取沉淀，在沉淀中加超纯水溶解加入硫酸铵使溶液中硫酸铵饱和度达到30~40%，搅拌，2~6℃温度下4000~6000r/min离心3~8min，取上清液。

5. 根据权利要求1所述的一种从微藻中提取防污活性物质的方法，其特征在于：所述的双水相萃取为：在分级盐析得到上清液中加入PEG4000和磷酸钾盐KHP，调节体系pH为5.5~6.5，PEG4000浓度为12~20%, KHP浓度为10~15%，400~800r/min搅拌，转移至分液漏斗中分层，取下相，得到防污活性物质溶液。

6.根据权利要求1所述的一种从微藻中提取防污活性物质的方法，其特征在于：所述的超滤纯化为：将双水相萃取得到的防污活性物质溶液转移到超滤离心管中，2~6℃温度下8000~12000r/min离心8~15min，得到防污活性物质；所述超滤离心管规格为20~40KDa。