[发明专利]一种利用玻璃拉针挑取多能干细胞克隆的方法

权利要求书

1.一种利用玻璃拉针的挑取多能干细胞克隆的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤:

(1)挑取克隆所用的玻璃拉针的制备：将玻璃巴氏吸管一端置于酒精灯上灼烧后拉伸至末端断裂，将末端烧结封闭，并将玻璃巴氏吸管加热向下弯曲至30～90°，制备成玻璃拉针；

(2)挑取多能干细胞克隆前的准备：在挑取克隆前需要先更换细胞的培养基，并对所需挑取的克隆在显微镜下进行拍照和标记；

(3)进行多能干细胞单克隆挑取时，首先利用步骤(1)中制备的玻璃拉针在显微镜下剥离干细胞克隆，使整个克隆脱离培养板底部，然后再利用200μL的枪头吸取克隆进行消化和传代。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(1)中，所述玻璃巴氏吸管分为管主体部分和圆锥管部分，管主体部分直径为6～8mm，长度为10～15cm，圆锥管部分直径为1～2mm，长度为10～15cm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(1)中，玻璃巴氏吸管加热位置为距离巴氏吸管圆锥管一端的1～2cm处，所述巴氏吸管的圆椎管的拉伸长度为2～3cm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(1)中，巴氏吸管圆椎管拉断的末端在酒精灯上烧结成细小的圆球状。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(1)中，玻璃巴氏吸管在距离圆锥管末端的6～8cm处，将所述管体位置进行加热至其受热部分向下弯曲至30°～90°。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(2)中，对克隆进行标记时，在克隆的附近，在培养板的底部打点标记，切勿在克隆的正下方打点标记，以免克隆被记号笔的颜色遮挡而影响克隆的挑取。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(3)中，剥离克隆的方法为将玻璃拉针的针尖放在记号笔标记的位置上，然后在显微镜下观察，找到显微镜中的玻璃拉针，慢慢移动玻璃拉针至克隆的附近，从克隆的四周轻轻推开克隆边缘，使克隆和周围的细胞分离开，然后轻推克隆，使整个克隆脱离培养板底部，将克隆从培养板中剥离出来。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(3)中，吸取克隆所用的200μL的枪头为AXYGEN不含滤芯的200μL枪头。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于,所述步骤(3)中，吸取克隆的方法为先在显微镜下找到剥离出来的克隆，然后将200μL的枪头放在记号笔标记的位置上，然后在显微镜下观察，找到显微镜中的枪头，慢慢移动枪头至克隆的附近，然后吸取克隆，进行消化和传代。