[发明专利]一种新型纳米基因载体及其制备方法有效
| 申请号： | 201711119318.1 | 申请日： | 2017-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN107837400B | 公开（公告）日： | 2022-05-20 |
| 发明（设计）人： | 张瑞平;杨曦;王斌全;范博;范曲立;程霞;高伟;纪钰;徐雯;李小燕 | 申请（专利权）人： | 山西省肿瘤医院 |
| 主分类号： | A61K47/64 | 分类号： | A61K47/64;A61K31/713;A61K41/00;A61K49/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 太原荣信德知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 14119 | 代理人： | 杨凯;连慧敏 |
| 地址： | 030013*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 纳米 基因 载体 及其 制备 方法 | ||
1.一种纳米基因载体，其特征在于：包括人体内源性物质合成的黑色素纳米颗粒MNP、聚赖氨酸PLL和基因SIRNA，所述聚赖氨酸对黑色素纳米颗粒进行修饰和改性，合成MNP-PLL,所述的MNP-PLL再通过静电作用与负电荷SIRNA结合形成MNP/PLL/SIRNA纳米基因载体。
2.根据权利要求1所述的一种纳米基因载体，其特征在于：所述MNP/PLL/SIRNA纳米基因载体粒径为60-70nm。
3.根据权利要求1所述的一种纳米基因载体，其特征在于：所述MNP/PLL/SIRNA纳米基因载体用于基因治疗和光热治疗。
4.一种纳米基因载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）制备黑色素纳米颗粒MNP
取黑色素melanin，加入氢氧化钠溶液中，超声振荡至混匀完全溶解；缓慢加入HCl溶液中和，并将细胞粉碎，离心，水洗和冷冻干燥，得到黑色素纳米颗粒；
（2）黑色素纳米颗粒的改性
称取1mg黑色素纳米粒子溶于1ml超纯水中，超声震荡至完全溶解；取2mg聚赖氨酸溶于1ml超纯水中，超声震荡至完全溶解；将1ml MNP水溶液逐滴滴入1ml聚赖氨酸水溶液中，在25℃下，用磁力搅拌过夜；第二天，将溶液移入超滤离心管3000KD中，加超纯水进行离心洗涤，3500rpm/min,离心5次；
（3）多功能纳米基因载体的构建
先将RNA干粉管放于掌上离心机进行离心，再加入125ul DEPC水溶解0.5 OD RNA干粉，配成10pmol/ul的SIRNA,分装备用，按照不同质量比，每次取10 pmol/ul RNA与等体积MNP-PLL在涡旋混合器上涡旋后静置，备用。
5.根据权利要求4所述的一种新型纳米基因载体的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中黑色素纳米颗粒溶液和聚赖氨酸溶液的质量比为1：2。
6.根据权利要求4所述的一种新型纳米基因载体的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中MNP-PLL溶液和SIRNA以质量比40开始，涡旋30s以后,静置20min,备用。
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