[发明专利]一种简化的蓝莓果实总DNA提取方法

说明书

本发明属于DNA提取方法技术领域，具体涉及一种简化的蓝莓果实总DNA提取方法。包括用氢氧化钠溶液和有机酸溶液对材料预处理、醛溶液、维生素C和DNA提取液的混合溶液对DNA提取、异丙醇沉淀、乙醇清洗等步骤。本发明的方法提取DNA耗时短、DNA纯度高，提取的DNA溶液呈透明颜色，而避免色素和多酚氧化的污染，特别适用于蓝莓果实总DNA的提取。

技术领域

本发明属于DNA提取方法技术领域，具体涉及一种简化的蓝莓果实总DNA提取方法。

背景技术

蓝莓属杜鹃花科，越桔属，果实呈深蓝色，球形或扁球形，直径约1cm，果皮薄，成熟果实呈蓝紫色，酸甜适口，可食性高。蓝莓果实中含有丰富的多糖、色素、果胶和保留遗传信息的DNA等物质。由于不同的蓝莓品种DNA之间存在差异，研究DNA与蓝莓表型之间的相互关系，在蓝莓育种和品种的改良方面具有良好的应用前景。

蓝莓DNA的研究免不了涉及到蓝莓果实中总DNA的提取，目前，最常用的DNA提取方法是常规的CTAB法，该步骤操作繁琐，且由于是通用性方法，没有考虑到不同样品之间的差异性。由于蓝莓果实中含有较多的多糖多酚和色素，这些物质易于DNA结合，影响提取的DNA的纯度。因此，有必要开发一种简化的、多酚和色素干扰的蓝莓果实总DNA提取方法。

发明内容

本发明提供的一种简化的蓝莓果实总DNA提取方法，是一种简化的、多酚和色素干扰的蓝莓果实总DNA提取方法，避免色素对DNA纯度的影响。

本发明目的是提供一种简化的蓝莓果实总DNA提取方法，包括以下步骤：

S1，材料预处理：采集蓝莓果实，捣碎，加入0.1mol/l的氢氧化钠溶液，研磨成浆，65±1℃件下孵育10min，用0.1mol/l有机酸溶液调节pH至6.0-7.0，得到预处理蓝莓浆；

S2，向预处理蓝莓浆中加入0.1mol/l醛溶液、维生素C和DNA提取液的混合溶液，37±1℃条件下水浴20min；离心，收集上清液；

其中，混合溶液中0.1mol/l醛溶液、维生素C和DNA提取液的比例为1ml:0.01-0.05g:20-30ml；预处理蓝莓浆与混合溶液的体积比例为1:1-2；

S3，向上清液中加入0.6-1倍体积经4℃预冷的异丙醇，混匀，-20℃放置≥30min，离心，弃上清，收集DNA沉淀；

S4，用乙醇溶液清洗DNA沉淀，溶解，得到蓝莓果实总DNA。

优选的，上述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，S1中，蓝莓果实与氢氧化钠溶液的比例为1g:5ml。

优选的，上述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，S1中，所述有机酸溶液为甲酸溶液或者乙酸溶液。

优选的，上述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，S2中，所述醛溶液为甲醛溶液或者乙醛溶液。

优选的，上述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，S2中1L DNA提取液中含有0.1molTris-HCl、0.1mol EDTA、1.5mol NaCl、10g CTAB，溶剂为双蒸水，pH 8.0。

优选的，上述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，S3中，异丙醇的体积用量是上清液体积的0.6倍。

优选的，上述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，S4中，乙醇溶液的体积浓度为70-80％。

与现有技术相比，本发明提供的一种简化的蓝莓果实总DNA提取方法，具有以下有益效果：