[发明专利]一种简化的蓝莓果实总DNA提取方法有效
| 申请号： | 201711105958.7 | 申请日： | 2017-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN107630013B | 公开（公告）日： | 2020-05-12 |
| 发明（设计）人： | 宋杨;刘凤之;张红军;王海波;刘红弟 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院果树研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 李振瑞 |
| 地址： | 125100 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 简化 蓝莓 果实 dna 提取 方法 | ||
1.一种简化的蓝莓果实总DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，材料预处理：采集蓝莓果实，捣碎，加入0.1mol/l的氢氧化钠溶液，研磨成浆，65±1℃件下孵育10min，用0.1mol/l有机酸溶液调节pH至6.0-7.0，得到预处理蓝莓浆；所述有机酸溶液为甲酸溶液或者乙酸溶液；
S2，向预处理蓝莓浆中加入0.1mol/l醛溶液、维生素C和DNA提取液的混合溶液，37±1℃条件下水浴20min；离心，收集上清液，所述醛溶液为甲醛溶液或者乙醛溶液；
其中，混合溶液中0.1mol/l醛溶液、维生素C和DNA提取液的比例为1ml:0.01-0.05g:20-30ml；预处理蓝莓浆与混合溶液的体积比例为1:1-2；
S3，向上清液中加入0.6-1倍体积经4℃预冷的异丙醇，混匀，-20℃放置≥30min，离心，弃上清，收集DNA沉淀；
S4，用乙醇溶液清洗DNA沉淀，溶解，得到蓝莓果实总DNA。
2.根据权利要求1所述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，其特征在于，S1中，蓝莓果实与氢氧化钠溶液的比例为1g:5ml。
3.根据权利要求1所述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，其特征在于，S2中1L DNA提取液中含有0.1mol Tris-HCl、0.1mol EDTA、1.5mol NaCl、10g CTAB，溶剂为双蒸水，pH8.0。
4.根据权利要求1所述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，其特征在于，S3中，异丙醇的体积用量是上清液体积的0.6倍。
5.根据权利要求1所述的简化的蓝莓果实总DNA提取方法，其特征在于，S4中，乙醇溶液的体积浓度为70-80％。
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